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肽类阳离子类脂的合成及生物性能研究

作　者: 陈美玲
导　师: 于世钧
学　校: 辽宁师范大学
专　业: 有机化学
关键词: 非病毒基因载体阳离子类脂阳离子脂质体脂质体/DNA复合物体外转染
分类号:
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

基因治疗的关键就是选择安全有效的载体，非病毒载体因毒性低，生物相容性好，制备容易等一些优点，逐渐取代病毒载体，具有广阔的应用前景。本文设计合成了两个肽类阳离子类脂，其极性头部分别为甘氨酸和甘氨酸二肽，产品重结晶后，经过ESI-MS、1H NMR、13C NMR、IR和LC表征，结构准确，纯度较高，可以满足基因转染。将所合成的类脂制成阳离子脂质体，通过透射电镜分析检测，脂质体分布较均匀，粒径大小分布在50-200nm之间，可应用于基因转染实验。通过延滞实验考察脂质体与DNA的结合能力，结果表明，脂质体与DNA的结合能力随着脂质体/DNA比例的增大而增加；极性头部为甘氨酸二肽的阳离子脂质体与DNA结合能力强于头部为氨基酸的阳离子脂质体；助类脂DOPE的加入可以提高脂质体与DNA的结合能力。利用所制备的阳离子脂质体作为基因运载工具，转运质粒pGFP-N2，对Hep-2细胞株进行了体外转染，研究了肽类阳离子类脂结构与其转染效率之间的关系。结果表明，脂质体与DNA的比例为4/1-6/1之间转染效率较高；二肽头部的脂质体比甘氨酸头部的脂质体转染效率更好；助类脂DOPE的加入可使脂质体的转染效率提高。本文将为新结构阳离子类脂的研究提供参考和思路。

全文目录

摘要  4-5
Abstract  5-9
引言  9-10
第一章文献综述  10-21
  1.1 基因治疗概述  10
  1.2 非病毒载体  10-11
  1.3 阳离子脂质体  11-17
    1.3.1 阳离子脂质体的构成  12-14
    1.3.2 阳离子类脂  14-15
    1.3.3 肽类阳离子脂质体  15-16
    1.3.4 阳离子脂质体的制备  16
    1.3.5 阳离子脂质体的应用  16-17
  1.4 阳离子脂质体介导基因转染  17-20
    1.4.1 阳离子脂质体与基因的作用  17
    1.4.2 阳离子脂质体/DNA 复合物进入细胞  17-18
    1.4.3 影响基因转染因素  18-20
      1.4.3.1 复合物的结构形态  18
      1.4.3.2 复合物性质参数  18-19
      1.4.3.3 阳离子脂质体的毒性  19
      1.4.3.4 转染细胞种类  19-20
  1.5 本课题研究内容  20-21
第二章肽类阳离子类脂的设计与合成  21-49
  2.1 合成路线的设计  21-24
  2.2 实验部分  24-27
    2.2.1 实验仪器与试剂  24-25
    2.2.2 化合物的合成  25-27
      2.2.2.1 中间体 FA 的合成  25-26
      2.2.2.2 中间体 A12 的合成  26
      2.2.2.3 中间体 BGA 的合成  26
      2.2.2.4 含甘氨酸头部的类脂 GA 的合成  26
      2.2.2.5 甘氨酸二肽的合成  26-27
      2.2.2.6 中间体 BGGA 的合成  27
      2.2.2.7 含甘氨酸二肽的阳离子类脂 GGA 的合成  27
  2.3 合成化合物结构表征  27-49
    2.3.1 中间体 FA 的结构表征  27-30
      2.3.1.1 FA 的质谱  27-28
      2.3.1.2 FA 红外光谱  28-29
      2.3.1.3 FA 核磁共振  29-30
    2.3.2 中间体 A12 的结构  30-32
      2.3.2.1 A12 的质谱  30-31
      2.3.2.2 A12 红外光谱  31
      2.3.2.3 A12 核磁共振  31-32
    2.3.3 中间体 BGA 的结构表征  32-35
      2.3.3.1 BGA 的质谱  32-33
      2.3.3.2 BGA 的红外光谱  33-34
      2.3.3.3 BGA 的核磁共振  34-35
    2.3.4 类脂 GA 的结构表征  35-39
      2.3.4.1 GA 的质谱  35-36
      2.3.4.2 GA 的红外光谱  36-37
      2.3.4.3 GA 的核磁共振  37-38
      2.3.4.4 GA 的液相色谱  38-39
    2.3.5 甘氨酸二肽的结构表征  39-41
      2.3.5.1 甘氨酸二肽的质谱  39-40
      2.3.5.2 甘氨酸二肽的红外光谱  40-41
      2.3.5.3 甘氨酸二肽的核磁共振  41
    2.3.6 BGGA 的结构表征  41-44
      2.3.6.1 BGGA 的质谱  41-42
      2.3.6.2 BGGA 的红外光谱  42-43
      2.3.6.3 BGGA 的核磁共振  43-44
    2.3.7 类脂 GGA 的结构表征  44-49
      2.3.7.1 类脂 GGA 的质谱  44-45
      2.3.7.2 GGA 的红外光谱  45-46
      2.3.7.3 类脂 GGA 的核磁共振  46-47
      2.3.7.4 GGA 的液相色谱  47-49
第三章阳离子类脂的生物学研究  49-60
  3.1 实验仪器与试剂  49-50
  3.2 实验方法  50-53
    3.2.1 阳离子脂质体制备与分析  50
    3.2.2 琼脂糖凝胶电泳实验  50-51
    3.2.3 阳离子脂质体转染实验  51-53
      3.2.3.1 细胞培养  51-52
      3.2.3.2 细胞铺板  52
      3.2.3.3 细胞转染  52-53
      3.2.3.4 基因表达分析  53
  3.3 脂质体的生物学研究  53-58
    3.3.1 延滞实验分析  53-55
      3.3.1.1 结构的影响  53-54
      3.3.1.2 助类脂的影响  54-55
    3.3.2 GA 与 GGA 的透射电镜图  55-56
    3.3.3 转染效率研究  56-58
      3.3.3.1 助类脂 DOPE 对脂质体转染效率的影响  56
      3.3.3.2 阳离子脂质体 GA+DOPE 的转染效率  56-57
      3.3.3.3 阳离子脂质体 GGA+DOPE 的转染效率  57-58
  3.4 本章小结  58-60
结论  60-61
参考文献  61-65
攻读硕士学位期间发表学术论文情况  65-66
致谢  66

肽类阳离子类脂的合成及生物性能研究

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