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中药复方诱导骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化的实验研究

作　者: 林砚铭
导　师: 邓友章
学　校: 成都中医药大学
专　业: 中医骨伤科学
关键词: 骨髓间充质干细胞神经元样细胞左归丸
分类号: R285
类　型: 博士论文
年　份: 2013年
下　载: 26次
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内容摘要

目的：本研究旨在通过补肾填精的中药复方(左归丸)诱导骨髓间充质干细胞分化,并通过免疫组化鉴定诱导分化后的细胞为神经元样细胞,从而为“肾藏精、生髓”的传统中医理论提供相应的实验依据。方法：实验一利用全骨髓贴壁法分离大鼠骨髓间充质干细胞,并在体外扩增、纯化,倒置显微镜下观察其形态,利用左归丸药液对分离后的细胞进行诱导分化,通过阿利新蓝染色、改良钙钴法碱性磷酸酶染色、神经元特异性烯醇化酶免疫组织化学染色以鉴定分化后的细胞是否为成骨细胞、软骨细胞、神经元样细胞。实验二利用全骨髓贴壁法分离大鼠骨髓间充质干细胞,利用左归丸拆药后的各组药液分别对获得的细胞进行诱导分化,并进行神经元特异性烯醇化酶免疫组织化学染色,计其阳性表达的细胞。结果：实验一显示,分离纯化后的细胞,经倒置显微镜观察其形态,再左归丸药液诱导分化后,经阿利新蓝染色、改良钙钴法磷酸酶染色、神经元特异性烯醇化酶免疫组织化学染色,证明获得的细胞向软骨细胞、成骨细胞、神经元样细胞进行了分化,获得的细胞的形态符合骨髓间充质干细胞的形态表现。实验二将获得的骨髓间充质干细胞,用左归丸拆药后的各组药液对其进行诱导分化,经NSE染色后计阳性表达细胞,结果显示撤出熟地NSE表达明显增高；撤除枸杞后阳性表达率下降最多,其次是山茱萸、山药、牛膝；撤出菟丝子不影响该酶的表达。结论：实验一：采用全骨髓贴壁法获得的细胞为大鼠骨髓间充质干细胞；中药复方左归丸对大鼠骨髓间充质干细胞有多向诱导分化作用。实验二：撤出熟地神经元烯醇化酶表达增高,提示熟地可能对BMSC向神经元样细胞方向分化有一定抑制作用(或调控作用)；枸杞对骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化的诱导作用最强,其次是山茱萸、山药、牛膝：菟丝子对骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化无明显的促进作用。

全文目录

摘要  2-3
Abstract  3-5
缩略词表  5-6
前言  6-9
第一部分研究的目的和意义  9-20
  1. 研究的目的和意义  9-20
    1.1. 目的  9
    1.2. 研究的意义和临床应用价值  9-11
    1.3. 目前研究现状  11-20
第二部分实验研究  20-36
  实验一大鼠BMSC的分离及左归丸对其诱导多向分化的实验研究  20-29
    1. 主要实验设备和实验材料  20-21
    2. 方法  21-24
    3. 实验结果  24-26
    4. 讨论  26-29
  实验二中药复方诱导大鼠BMSC向神经元样细胞分化的实验研究  29-36
    1. 主要实验设备和实验材料  29-30
    2. 方法  30-32
    3. 实验结果  32-33
    4. 讨论  33-36
第三部分问题与展望  36-39
  1. 传统中医“肾”生理功能的与干细胞研究  36
  2. 实验中存在的问题  36-37
  3. 展望  37-39
附图  39-41
综述  41-72
参考文献  72-82
在校期间公开发表的学术论文、专著及科研成果  82-83
致谢  83-84

中药复方诱导骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化的实验研究

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