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左归丸对庆大霉素诱导耳肾损伤大鼠模型JNK/c-Jun通路的影响及机制

作　者: 范为民
导　师: 王小琴
学　校: 湖北中医药大学
专　业: 中医内科学
关键词: JNK信号通路 耳肾损伤模型 左归丸 SP600125 肾开窍于耳 耳肾综合征
分类号: R277.5
类　型: 博士论文
年　份: 2013年
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内容摘要


目的：探讨左归丸对庆大霉素诱导耳肾损伤大鼠模型JJNK通路的影响及机制。方法：(1)将12只SPF级雄性Wistar大鼠适应性喂养1周后,随机分为空白对照组、庆大霉素组。每组6只。空白对照组腹腔注射生理盐水2.5ml·kg-1·d-1,庆大霉素组腹腔注射硫酸庆大霉素100mg·kg-1·d-1。每日根据体重调整给药剂量。2组大鼠连续给药10d。分别在给药前和给药后检测大鼠听力ABR阈值、尿NAG酶值,在实验结束取耳蜗和肾脏标本进行HE染色,在光镜下观察耳蜗和肾脏病理变化。(2)将18只SPF级Wistar大鼠适应性喂养1周后随机分为3组：空白对照组,模型组和左归丸组。每组6只。空白对照组腹腔注射生理盐水2.5ml·kg-1·d-1,模型组腹腔注射硫酸庆大霉素100mg·kg-1·d-1,左归丸组腹腔注射硫酸庆大霉素100mg·kg-1·d-1和灌胃左归丸水溶液10g·kg-1·d-1。每日根据体重调整给药剂量。3组大鼠连续给药10d。分别在给药前和给药后检测大鼠听力ABR阈值、尿NAG酶值、大鼠体重变化。实验结束后,测量大鼠肾脏指数,留取血液检测Scr、BUN。留取耳蜗和肾脏标本光镜和电镜下观察病理变化。(3)将72只SPF级Wistar大鼠适应性喂养1周后随机分为4组：空白对照组,模型组、SP600125组和左归丸组。每组18只。空白对照组腹腔注射生理盐水2.5ml·kg-1·d-1;模型组腹腔注射硫酸庆大霉素100mg·kg-1·d-1; SP600125组左侧腹腔注射硫酸庆大霉素100mg·kg-1·d-1,2h后右侧腹腔注射SP60012515mg·kg-1·d-1;左归丸组腹腔注射硫酸庆大霉素100mg·kg-1·d-1和灌胃左归丸水溶液10g·kg-1·d-1。每日根据体重调整给药剂量。4组大鼠连续给药10d。实验结束后,留取耳蜗和肾脏标本,以免疫组化方法、免疫印迹杂交方法、实时定量PCR方法检测JJNK、p-JNK、c-Jun的表达和蛋白、基因的含量。结果：(1)庆大霉素组大鼠腹腔注射100mg·kg-1·d-1×10d后,听力ABR阈值和尿NAG酶值明显升高,与空白对照组相比,具有统计学差异(P<0.01)。大鼠耳蜗、肾脏病理形态比较：空白对照组螺旋器毛细胞完整无缺失,排列整齐；肾脏小管、间质无特殊改变。而庆大霉素组螺旋器毛细胞出现丢失、变性、排列不规则；肾小管出现炎性细胞浸润,并出现细胞肿胀、变性。(2)3组大鼠ABR阈值、尿NAG酶、血Scr与BUN、肾脏指数结果：与空白对照组相比,模型组ABR阈值、尿NAG酶、血Scr与BUN、肾脏指数值明显升高,具有统计学差异(P<0.01)；与模型组相比,左归丸组ABR阈值、尿NAG酶、血Scr与BUN、肾脏指数值明显下降,具有统计学差异(P<0.05或P<0.01)。大鼠体重结果：与空白组相比,模型组大鼠体重数值明显降低,具有统计学差异(P<0.01)；与模型组相比,左归丸组大鼠体重数值得到升高,具有统计学差异(P<0.05)。耳蜗、肾脏HE染色病理结果：空白对照组耳蜗螺旋器毛细胞无缺失,排列整齐；肾脏小管、间质无特殊改变。而模型组耳蜗螺旋器毛细胞出现核固缩、核破裂,毛细胞丢失严重；肾脏小管上皮细胞出现肿胀、变性和少量坏死。左归丸组耳蜗毛细胞有少量丢失,排列尚可；肾脏小管上皮细胞出现轻微肿胀、变性。透射电镜超微病理结果：空白对照组耳蜗线粒体、粗面内质网结构未发生明显改变；近曲肾小管上皮细胞整体结构正常,基底面有排列整齐的质膜内褶,胞浆及质膜内褶间分布众多线粒体。模型组耳蜗胞浆溶酶体增多,部分出现空泡化；近曲肾小管上皮细胞游离面局部微绒毛脱落,胞浆内多处巨大囊泡扩张。左归丸组耳蜗毛细胞形态结构基本正常,部分胞浆空泡化；近曲肾小管微绒毛排列整齐,胞浆内少量囊泡病变,管腔内有少量絮状物。(3) TUNEL细胞凋亡结果：空白对照组耳蜗和肾脏有少量凋亡细胞,模型组耳蜗和肾脏TUNEL阳性细胞数目明显增多具有统计学差异(P<0.01)；与模型组比较,左归丸组和SP600125组耳蜗和肾脏TUNEL阳性细胞数目明显减少,具有显著统计学差异(P<0.01)。免疫组化结果：空白对照组耳蜗和肾脏JNK、p-JNK、c-Jun蛋白表达较少。与空白对照组相比,模型组JNK、p-JNK、c-Jun蛋白有大量表达,具有显著统计学差异(P<0.01)。耳蜗主要集中在螺旋器、血管纹、螺旋神经节部位表达；肾脏主要集中在肾小管部位。与模型组相比,左归丸组和SP600125组表达减少,具有显著统计学差异(P<0.01)。免疫印迹杂交结果：与空白组相比,模型组耳蜗和肾脏JNK、p-JNK、c-Jun蛋白表达显著升高,具有显著统计学差异(P<0.01)；与模型组相比,左归丸组SP600125组耳蜗和肾脏JNK、p-JNK、c-Jun蛋白表达明显下降,具有显著统计学差异(P<0.01)。实时定量PCR结果：与空白组相比,模型组内耳和肾脏JNK mRNA和c-Jun mRNA表达显著升高(P<0.01)；与模型组相比,SP600125组JNK mRNA和c-Jun mRNA表达显著下调(P<0.01)结论：(1)大鼠腹腔注射庆大霉素100mg·kg-1·d-1×10d可以成功建立耳肾损伤模型。(2)左归丸能够保护耳肾损伤大鼠的听力和肾功能,能够改善耳肾损伤大鼠耳蜗和肾脏病理状况,能够减轻病理性细胞凋亡状态。(3) JNK/c-Jun通路对庆大霉素诱导的耳肾损伤模型中细胞凋亡起重要调控作用,激活的JNK/c-Jun通路促使病理性细胞凋亡的发生,并参与庆大霉素诱导的耳肾损伤。(4)左归丸能够抑制JNK通路在耳肾损伤大鼠模型的激活。左归丸对耳肾损伤大鼠的保护作用可能与抑制JNK通路的激活有关。

全文目录


中文摘要  5-8
Abstract  8-13
中英文缩略词表  13-14
前言  14-16
第一部分 大鼠耳肾损伤模型的建立  16-25
  材料与方法  16-20
  结果  20-21
  讨论  21-24
  结论  24-25
第二部分 左归丸对庆大霉素诱导耳肾损伤模型的保护作用  25-37
  材料与方法  25-29
  结果  29-32
  讨论  32-36
  结论  36-37
第三部分 左归丸对庆大霉素诱导耳肾损伤模型JNK/c-Jun通路的影响及机制  37-62
  材料与方法  37-48
  结果  48-55
  讨论  55-61
  结论  61-62
结语  62-63
参考文献  63-72
附录  72
附一 文献综述  72-92
  综述一  72-81
    参考文献  79-81
  综述二  81-92
    参考文献  87-92
附二 实验图片  92-107
附三 博士在读期间发表文章  107-108
致谢  108

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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中医其他学科 > 中医泌尿学
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