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绵羊卵泡CART蛋白表达及其在颗粒细胞体外培养中的作用

作　者: 庞钰莹
导　师: 吕丽华
学　校: 山西农业大学
专　业: 动物遗传育种与繁殖
关键词: 绵羊 卵泡 CART 免疫组化 颗粒细胞 体外培养
分类号: S826
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
下　载: 19次
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内容摘要


绵羊卵巢卵泡的生长发育和闭锁是一个复杂的生理过程,在此过程中存在多种影响因素。胰岛素和FSH在促进卵泡生长发育过程中发挥重要作用。近年来发现的一种内源性的神经肽可卡因-苯丙胺调节转录肽(Cocaine-and Amphetamine-Regulated Transcript, CART),除了参与哺乳动物内分泌调节、新陈代谢、肥胖、精神焦虑等多种生理活动外,还能够抑制牛卵巢卵泡颗粒细胞的功能。本试验将在以前研究的基础上,对以下内容进行研究：用免疫组化技术检测CART蛋白在绵羊卵巢卵泡是否有表达；在无血清条件下,建立绵羊卵泡颗粒细胞体外培养体系,从而找到适合颗粒细胞的体外生长条件；并在此基础上探讨CART对颗粒细胞体外培养的影响。主要试验的结果及分析如下：(1)免疫组化技术对绵羊卵巢卵泡中CART蛋白定位,‘结果表明CART在大、中、小卵泡中都有表达,而且在卵泡中主要表达于颗粒细胞和内膜细胞,对照组没有特异性着色。(2)在无血清的体外培养体系中,胰岛素和FSH促进颗粒细胞增殖和雌激素分泌,与浓度相关,存在剂量依赖效应关系。当FSH浓度达到5ng/mL,胰岛素浓度为0ng/mL时,颗粒细胞的数目有了明显的增多,雌激素的分泌量达到最大值(P<0.05)；此时颗粒细胞的生长状态最好,为最佳的体外培养浓度。(3)本试验发现,部分绵羊卵泡颗粒细胞有聚集生长的特性,能形成胚胎干细胞样集落,但是否具有千细胞特异性还需要进一步研究。(4)CART对绵羊的颗粒细胞体外培养具有重要的调控作用。CART的浓度达到0.1μM时,雌激素的分泌量最低；与未添加组相比,差异极显著(P<0.01)。CART对绵羊卵巢卵泡颗粒细胞的增殖和激素的分泌具有抑制作用。当CART浓度继续升高至1μ.M时,相对于CART0.1μM,雌激素的分泌量反而有所升高,但差异不显著。

全文目录


摘要  8-9
前言  9-10
第一章 文献综述  10-18
  1 颗粒细胞与卵泡的生长发育、闭锁的关系  10-12
    1.1 卵泡的发育  10
    1.2 颗粒细胞在原始卵泡生长启动中的作用  10
    1.3 颗粒细胞对生长卵泡的影响  10-11
    1.4 颗粒细胞对成熟卵泡的影响  11
    1.5 颗粒细胞对卵泡闭锁的影响  11-12
  2 FSH对卵泡发育的影响  12-13
    2.1 FSH的合成和分泌  12
    2.2 FSH对腔前卵泡发育的影响  12
    2.3 FSH对有腔卵泡的影响  12-13
  3 胰岛素的作用机制及对卵泡发育的影响  13-14
  4 CART的发现及研究进展  14-16
    4.1 CART的发现及分布  14-15
    4.2 CART生物功能的研究  15-16
      4.2.1 CART对能量代谢的影响  15
      4.2.2 CART对摄食、肥胖的影响  15
      4.2.3 CART对动物繁殖的影响  15-16
  5 研究的主要内容  16-17
  6 选题的意义  17-18
第二章 CART蛋白在绵羊卵巢卵泡中的表达  18-22
  1 材料与方法  18-19
    1.1 试验动物及取样  18
    1.2 主要仪器及试剂  18-19
      1.2.1 主要仪器  18
      1.2.2 主要试剂  18
      1.2.3 试剂的配制  18-19
    1.3 试验方法  19
      1.3.1 玻片的处理  19
      1.3.2 包埋和石蜡切片的制备  19
      1.3.3 HE染色  19
      1.3.4 免疫组化  19
  2 结果与分析  19-21
  3 讨论  21
  4 小结  21-22
第三章 绵羊卵巢卵泡颗粒细胞体外培养体系优化  22-31
  1 材料与方法  22-24
    1.1 试验材料  22
    1.2 主要仪器及试剂  22-23
      1.2.1 主要仪器  22
      1.2.2 主要试剂  22
      1.2.3 主要溶液的配制  22-23
    1.3 试验方法  23-24
      1.3.1 取细胞  23
      1.3.2 细胞计数  23
      1.3.3 细胞培养  23-24
      1.3.4 换液  24
      1.3.5 激素的测定  24
  2 结果与分析  24-29
    2.1 FSH和胰岛素对颗粒细胞生长和增殖的影响  24-27
      2.1.1 颗粒细胞的生长情况  24-26
      2.1.2 FSH和胰岛素对细胞增殖的影响  26-27
    2.2 FSH和胰岛素对雌激素分泌量的影响  27-29
      2.2.1 激素标准曲线的绘制  27-28
      2.2.2 FSH和胰岛素对颗粒细胞雌激素分泌量的影响  28-29
  3 讨论  29-30
    3.1 FSH和胰岛素的作用机理  29
    3.2 FSH和胰岛素对颗粒细胞的影响  29-30
  4 小结  30-31
第四章 CART对绵羊卵巢卵泡颗粒细胞体外培养的影响  31-38
  1 材料与方法  31-33
    1.1 试验材料  31
    1.2 主要仪器及试剂  31-32
      1.2.1 主要仪器  31
      1.2.2 主要试剂  31
      1.2.3 主要溶液的配制  31-32
    1.3 试验方法  32-33
      1.3.1 细胞悬液的获取  32
      1.3.2 细胞的体外培养  32-33
  2 结果与分析  33-36
    2.1 CART对颗粒细胞生长和增殖的影响  33-35
      2.1.1 颗粒细胞的生长情况  33-34
      2.1.2 CART对细胞生长和增殖的影响  34-35
    2.2 CART对颗粒细胞雌激素分泌量的影响  35-36
  3 讨论  36-37
  4 小结  37-38
全文结论  38-39
参考文献  39-43
ABSTRACT  43-45
附录  45-47
致谢  47

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中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 家畜 > 羊
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