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ISSRs在杜仲遗传多样性研究及性别鉴定中的应用

作　者: 王弦云
导　师: 曹翠萍
学　校: 安徽农业大学
专　业: 园林植物与观赏园艺
关键词: 杜仲 ISSRs PCR反应体系遗传多样性性别鉴定
分类号: S567.19
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

杜仲(Eucommia ulmoides Oliv.)是我国名贵的药用植物，本论文包含两部分主要内容：（1）杜仲ISSR-PCR反应体系的建立与引物筛选及其在遗传多样性研究中的应用；（2）基于ISSR分子标记的杜仲雌雄性别鉴定。通过正交试验建立了适合杜仲的ISSR-PCR反应体系，即总体积为20.0μL：DNA(5-10ng·μL-1)2.0μL，dNTP (10mmol·L-1)0.25μL，引物(10μmol·L-1)0.7μL，Mg2+(25mmol·L-1)2.4μL， Taq DNA聚合酶(5U·μL-1)0.2μL，10×PCR缓冲液2.8μL，HPLC水11.65μL；同时筛选出了14条多态性较高的有效引物；初步分析了杜仲的遗传多样性，共扩增出108个多态性位点，有效等位基因数ne为1.505，Nei’s期望杂合度He为0.308，Shannon多态性信息指数I为0.472。研究结果初步揭示了杜仲具有较高的遗传多样性，表明ISSR标记技术适用于杜仲的遗传多样性研究，为杜仲多居群的遗传多样性研究奠定了理论和技术基础。以杜仲雌雄植株为材料，根据已建立的反应体系和扩增程序，对杜仲雌雄植株进行了性别鉴定。结果表明，利用引物UBC858扩增出一条大小为3000bp的雌性特异性条带，且这条特异带在雄性植株中没有出现，说明ISSR分子标记可用于杜仲雌雄性别的的早期鉴定。研究结果为杜仲种质资源在幼苗时期的合理配置，现有杜仲种质资源的保护、交流、永续利用，以及在此基础上的分子育种提供可靠的、准确的理论依据和实践指导。

全文目录

摘要  3-4
Abstract  4-7
1 文献综述  7-23
  1.1 杜仲简介  7-10
    1.1.1 杜仲的生物学特性  8-9
      1.1.1.1 形态特征  8
      1.1.1.2 生长习性  8
      1.1.1.3 繁殖方式  8-9
    1.1.2 杜仲的价值  9-10
      1.1.2.1 药用价值  9
      1.1.2.2 保健价值  9
      1.1.2.3 经济价值  9-10
      1.1.2.4 生态价值  10
  1.2 物种的遗传多样性  10-13
    1.2.1 遗传多样性的检测方法  10-12
      1.2.1.1 形态学标记  10-11
      1.2.1.2 细胞学标记  11
      1.2.1.3 生化标记  11
      1.2.1.4 分子标记  11-12
    1.2.2 遗传变异的量化  12-13
      1.2.2.1 基本的遗传参数  12
      1.2.2.2 遗传变异的度量  12-13
  1.3 植物性别鉴定的研究方法  13-16
    1.3.1 外部形态鉴定  13-14
    1.3.2 生理生化差异鉴定  14
    1.3.3 同工酶差异鉴定  14-15
    1.3.4 特异蛋白质以及氨基酸含量差异鉴定  15
    1.3.5 染色体组型鉴定  15-16
    1.3.6 核酸鉴定  16
  1.4 常见分子标记技术  16-22
    1.4.1 RFLP 分子标记  17
    1.4.2 RAPD 分子标记  17-18
    1.4.3 AFLP 分子标记  18-19
    1.4.4 SRAP 分子标记  19-20
    1.4.5 SCAR 分子标记  20-21
    1.4.6 SSR 分子标记  21
    1.4.7 ISSR 分子标记  21-22
  1.5 研究的内容、目的和意义  22-23
2 杜仲 ISSR-PCR 反应体系的建立与引物筛选及其在遗传多样性研究中的应用  23-33
  2.1 引言  23
  2.2 材料与方法  23-26
    2.2.1 材料  23
    2.2.2 方法  23-26
      2.2.2.1 DNA 提取  23-24
      2.2.2.2 ISSR-PCR 反应体系的建立  24
      2.2.2.3 ISSR-PCR 引物筛选  24-26
      2.2.2.4 数据分析  26
  2.3 结果与分析  26-31
    2.3.1 正交试验  26
    2.3.2 引物筛选  26-30
    2.3.3 遗传多样性分析  30-31
  2.4 讨论与结论  31-33
3 基于 ISSR 分子标记的杜仲雌雄性别鉴定  33-36
  3.1 引言  33-34
  3.2 材料与方法  34
    3.2.1 材料  34
    3.2.2 方法  34
      3.2.2.1 DNA 提取  34
      3.2.2.2 杜仲雌雄基因组 ISSR-PCR 分析  34
  3.3 结果  34-35
  3.4 讨论  35-36
4 参考文献  36-44
5 附录  44-54
  附录1 杜仲图片  44-45
  附录2 ISSR 反应规程  45-46
  附录3 杜仲 ISSR 遗传多样性参数  46-49
  附录4 ISSR 引物序列(UBC SET#9)  49-51
  附录5 中英文缩写与注释  51-52
  附录6 试剂的配制  52-53
  附录7 单位换算  53-54
致谢  54-55
个人简历  55

ISSRs在杜仲遗传多样性研究及性别鉴定中的应用

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