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沙利度胺对脑胶质瘤U251细胞辐射敏感性的影响及其作用机制研究

作　者: 孙美玲
导　师: 刘芬菊
学　校: 苏州大学
专　业: 放射医学
关键词: 胶质瘤辐射敏感性沙利度胺 VEGF 细胞周期
分类号: R739.4
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 32次
引　用: 1次
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内容摘要

目的:脑胶质瘤占原发性脑肿瘤的50%左右,临床治疗效果不佳,主要治疗手段为手术治疗,但胶质瘤多呈浸润性生长,手术难以彻底清除。除此之外,脑胶质瘤对放射敏感性较低,化疗易产生耐药性,因此多种治疗方案的联合应用是研究的重点。VEGF(Vascular Endothelial Growth Factor)是一种具有信号肽结构的糖蛋白,其表达水平与胶质瘤的发生发展及恶性程度呈正相关。Cyclin B1是G2/M期调控点重要调控蛋白,对细胞增殖起着重要的调控作用,同样在胶质瘤细胞中高度表达,引起恶性增殖。沙利度胺(酞胺哌啶酮thalidomide)属于非巴比妥类药物,最早作为镇静止吐药物用于临床,后发现具有严重的致畸作用而被禁用。在研究沙利度胺致畸作用时,发现能抑制VEGF的表达,进而抑制血管生成,对抗肿瘤增生和转移有重要价值。本课题的目的通过研究沙利度胺对脑胶质瘤细胞增殖抑制作用;沙利度胺对细胞辐射敏感性的影响;沙利度胺对胶质瘤细胞VEGF mRNA和蛋白表达以及细胞周期进程的影响;探讨沙利度胺抑制胶质瘤U251细胞增殖和增强细胞辐射敏感性的机制。方法:采用MTT法检测沙利度胺对胶质瘤U251细胞存活率的影响;细胞划痕实验观察沙利度胺抑制U251细胞的浸润能力;细胞克隆形成法检测药物对细胞增殖活性变化的影响;H3-TdR掺入法研究沙利度胺单用及联合X射线照射对U251细胞DNA合成抑制作用;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测VEGF mRNA的相对表达水平;流式细胞仪检测沙利度胺联合X线照射对细胞周期进程的影响; Western blot分析VEGF和Cyclin B1蛋白表达变化。结果:①MTT检测分析显示:沙利度胺对胶质瘤细胞的增殖抑制作用随着浓度的增高和时间的延长而缓慢增加。②细胞划痕实验观察对照组细胞48h几乎长满中间的空白区域,沙利度胺处理组,48h随着浓度的增加细胞向中间空白区域侵润生长能力逐渐减弱。③照射剂量与沙利度胺浓度对细胞的克隆形成存在交互作用(p<0.01)。当细胞存活率为50%时,100μg/ml沙利度胺的辐射增敏系数为1.51。④沙利度胺浓度为100μg/ml时,3H-TdR掺入率为92.11%,联合4GyX线照射后3H-TdR掺入率为73.71%。⑤沙利度胺可以抑制VEGF mRNA的表达,随着沙利度胺浓度的增加,VEGF mRNA表达量减少,联合X线照射,减少更明显。⑥低剂量辐射在24h内可以诱导VEGF蛋白的表达,随着时间的延长表达减少;辐射诱导周期蛋白CyclinB1表达增加,联用沙利度胺后CyclinB1蛋白表达减少。⑦流式细胞仪检测细胞周期结果显示,不同时间处于G0/G1期的细胞增多,但无显著性差异。结论:①沙利度胺对脑胶质瘤U251细胞属低细胞毒性药物。②沙利度胺抑制胶质瘤U251细胞DNA合成。③一定浓度的沙利度胺对细胞增殖和克隆形成有辐射增敏作用。④沙利度胺对VEGF mRNA表达有明显的抑制作用。Western blot检测分析结果显示:24h内低剂量辐射可以诱导VEGF蛋白的表达,为临床胶质瘤的治疗提供理论依据。沙利度胺对脑胶质瘤U251细胞具有一定的辐射增敏作用,其机制与抑制VEGF表达有关。

全文目录

中文摘要  4-6
Abstract  6-9
引言  9-11
第一部分沙利度胺对脑胶质瘤 U251 细胞辐射敏感性的影响  11-25
  一、材料和仪器  11-12
  二、实验方法  12-14
  三、结果  14-22
  四、讨论  22-25
第二部分沙利度胺对 U251 细胞辐射敏感性影响的机制研究  25-42
  一、沙利度胺联合辐射作用于U251 细胞VEGF mRNA 表达  25-29
  二、沙利度胺联合辐射作用于 U251 细胞周期进程影响  29-32
  三、沙利度胺对辐射作用于U251 细胞 VEGF 及 CyclinB1 蛋白表达  32-42
结论  42-43
参考文献  43-48
综述  48-55
攻读学位期间本人出版或公开发表的论著、论文  55-56
致谢  56-57

沙利度胺对脑胶质瘤U251细胞辐射敏感性的影响及其作用机制研究

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