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外源性透明质酸对兔骨髓间充质干细胞定向分化为软骨细胞的影响

作　者: 寇建强
导　师: 王英振
学　校: 青岛大学
专　业: 外科学
关键词: 骨髓间充质干细胞软骨细胞透明质酸分化
分类号: R329
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

背景：骨髓间充质干细胞有多向分化潜能,在不同的诱导条件下可以分化成许多不同的组织,近年来已成为组织工程软骨构建过程中最常用的种子细胞。目的：通过分析外源性透明质酸对兔骨髓间充质干细胞体外增殖及定向分化为软骨细胞的影响,探讨关节腔内环境对骨髓间充质干细胞的作用。方法：全骨髓法+贴壁培养法分离培养兔骨髓间充质干细胞,取第4代细胞用于实验,实验组细胞加入透明质酸诱导液,以转化生长因子β3诱导组作为阳性对照,阴性对照组加入常规培养液。分别于诱导后第7,14,21 d行甲苯胺蓝染色检测蛋白聚糖表达,免疫组化染色及RT-PCR检测细胞Ⅱ型胶原表达。结果：经透明质酸诱导后,细胞增殖速度减慢,由长梭形变为多角形、椭圆形,细胞外基质呈甲苯胺蓝异染性和Ⅱ型胶原免疫组化阳性, RT-PCR检测示Ⅱ型胶原mRNA表达阳性,表现出软骨细胞的分化特点,但表达均比阳性对照组弱。结论：外源性透明质酸具有诱导兔骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化的能力,但比转化生长因子β3的诱导能力弱。结果提示,关节腔内环境对骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化有正性促进作用,支持透明质酸作为软骨组织工程基质使用。

全文目录

摘要  2-3
Abstract  3-5
引言  5-6
第一章材料与方法  6-11
  1.1 材料  6-8
    1.1.1 试剂  6
    1.1.2 实验动物  6
    1.1.3 主要仪器  6-7
    1.1.4 实验试剂的配制方法  7-8
  1.2 实验方法  8-11
    1.2.1 兔BMSCs的体外分离与培养  8
    1.2.2 BMSCs的生长曲线测定  8
    1.2.3 透明质酸诱导兔BMSCs向成软骨细胞分化  8
    1.2.4 形态学观察  8-9
    1.2.5 细胞爬片的甲苯胺蓝染色  9
    1.2.6 免疫组化染色法检测BMSCsⅡ型胶原的表达  9
    1.2.7 RT-PCR  9-10
    1.2.8 统计学分析  10-11
第二章结果  11-12
  2.1 细胞的形态学观察  11
  2.2 甲苯胺蓝染色结果  11
  2.3 免疫组化染色结果  11
  2.4 RT-PCR结果  11
  2.5 统计学分析结果  11-12
第三章讨论  12-15
第四章结论  15-16
参考文献  16-18
附图  18-24
综述  24-33
  综述参考文献  29-33
攻读学位期间的研究成果  33-34
致谢  34-35

外源性透明质酸对兔骨髓间充质干细胞定向分化为软骨细胞的影响

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