学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

外源性Smad-7联合TIMP-lsiRNA对大鼠肝纤维化干预治疗的实验研究

作　者: 陈燕
导　师: 郑勇
学　校: 石河子大学
专　业: 内科学
关键词: 肝纤维化 Smad-7 TIMP-1 RNAi 质粒
分类号: R575.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 29次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

目的：本研究复制肝纤维化大鼠模型,通过腹腔注射经脂质体包埋的重组Smad-7与TIMP-1siRNA真核细胞表达质粒,对肝纤维化大鼠进行干预治疗,分析两种质粒及联合作用对大鼠肝纤维化的影响。材料和方法：1.四氯化碳复合因素法建立肝纤维化大鼠模型：40%四氯化碳棉籽油溶液给大鼠皮下注射,0.3 mL/100 g体重(首次剂量0.5 mL/100 g),后每隔4天注射一次,每次3ml/kg,共注射12次,20%乙醇溶液作为唯一饮用液体,并给予高脂高胆固醇饲料。设立正常对照组大鼠,同期皮下注射生理盐水,剂量同实验组,采用标准饲养方法。2.重组质粒的导入：各干预组及对照组采用脂质体包埋法分别将Smad-7/pcDNA3.1 (+)、TIMP-1SiRNA/pcDNA3.1(+)重组质粒及pcDNA3.1(+)质粒各100μtg导入大鼠肝纤维化模型。S组采用Smad-7/pcDNA3.1 (+)质粒；T组采用TIMP-1 SiRNA/pcDN A3.1 (+)质粒；S+T组采用Smad-7/pcDNA3.1 (+)+TIMP-1SiRNA/pcDNA3.1(+)质粒；空质粒对照组给予pcDNA3.1(+)质粒。同时正常对照组腹腔注射0.9%的生理盐水0.5mL。每7天1次至第8周。注射前各组重组质粒均按比例与脂质体Lipofectmine2000混匀,经腹腔注射法导入大鼠体内。3.结果观察：应用苏木素-伊红染色及苦味酸-酸性品红染色观察肝组织病理形态学变化,进行肝纤维化分级；应用免疫组化法观察肝组织中Ⅲ型胶原蛋白的表达；采用Western blot法检测Ⅰ型胶原蛋白表达,采用逆转录PCR技术(RT-PCR)检测Smad-2、TIMP-1mRNA的表达,同时检测β-actin的表达作为内参照,用计算机图像分析技术检测以上指标表达的强弱。实验结果计量资料采用SPSS 13.0软件描述实验数据特征,作Kruskal-Wallis法非参数检验(成组设计多样本比较秩和检验及多样本间两两比较秩和检验),P<0.05显示差异有显著性。等级资料病理形态学分级结果作Ridit分析。结果：1.免疫组化法观察肝组织中Ⅲ型胶原蛋白的表达：各治疗组Ⅲ型胶原表达量均较肝纤维化对照组减少,P<0.05,差异有统计学意义；并且联合治疗组与各单一治疗组比较：胶原表达明显减少,P<0.01,差异有统计学意义。2. Western blot法检测Ⅰ型胶原蛋白表达：各治疗组Ⅰ型胶原表达量均较肝纤维化对照组减少,P<0.05,差异有统计学意义；并且联合治疗组与各单一治疗组比较：胶原表达明显减少,P<0.01,差异有统计学意义。3. RT-PCR检测Smad-2、TIMP-1mRNA的表达：各治疗组Smad-2mRNA表达量均较肝纤维化对照组减少,P<0.05,差异有统计学意义；并且联合治疗组与各单一治疗组比较：Smad-2mRNA表达量减少,P<0.05,差异有统计学意义。各治疗组TIMP-1mRNA表达量均较肝纤维化对照组减少,P<0.05,差异有统计学意义；并且联合治疗组与各单一治疗组比较：TIMP-1mRNA表达量减少,P<0.05,差异有统计学意义。结论：1.TIMP-1siRNA/pcDNA3.1(+)真核细胞表达质粒及Smad-7/pcDNA3.1(+)真核细胞表达质粒均能降低Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达水平,尤以TIMP-1 siRNA + Smad-7联合治疗组最为明显；2.通过同时阻断MMPs-TIMPs系统和TGF-β/Smad-7信号通路进行抗纤维化,比单独阻断其中一条通路抗肝纤维化效果好,进一步证实肝纤维化发生与发展是多种通路共同参与的过程。

外源性Smad-7联合TIMP-lsiRNA对大鼠肝纤维化干预治疗的实验研究

内容摘要

全文目录

相似论文