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趋化因子Mig拯救Akt活性介导口腔舌鳞癌Tca8113细胞耐热的研究

作　者: 张长彬
导　师: 何永文
学　校:
专　业: 口腔临床医学
关键词: 人舌鳞癌Tca8113细胞 趋化因子Mig CXCR3 热疗 细胞凋亡
分类号: R739.86
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要


[目的]探索趋化因子Mig介导口腔舌鳞癌Tca8113细胞耐热的作用及相关分子机制。[方法](1)Tca8113细胞常规培养后,分组处理：Mig处理组(100nM Mig因子处理Tca8113细胞6h),Mig+Akt抑制剂组(100nM Mig+12nM Akt抑制剂MK-2206同时处理Tca8113细胞6h),热诱导组(43℃80min水浴加热处理Tca8113细胞),Mig+热诱导组(100nM Mig处理Tca8113细胞6h后,43℃80min水浴加热处理Tca8113细胞),Mig+Akt抑制剂+热诱导组(100nM Mig+12nM Akt抑制剂MK-2206同时处理Tca8113细胞6h后,43℃80min水浴加热处理Tca8113细胞)。(2) Full moon PCS248磷酸化蛋白芯片杂交技术检测Tca8113细胞及Mig处理组、热诱导处理组和Mig+热诱导处理组Tca8113细胞相关蛋白磷酸化水平,差异比较,行相关信号通路分析。(3)倒置显微镜观察各组细胞形态变化。(4)TUNEL标记流式细胞仪检测各组细胞凋亡率。(5)流式细胞仪检测活化Caspase-3在各组活细胞中的比值及线粒体膜电位。(6)免疫印迹进一步验证分析相关信号通路蛋白磷酸化水平变化。(7)采用SPSS17.0统计软件对数据进行统计学分析。[结果](1)Full moon PCS248磷酸化蛋白芯片杂交检测发现,热诱导处理Tca8113细胞后,5种蛋白磷酸化水平明显升高(升高2倍以上)；6种蛋白磷酸化水平明显降低(降低0.6倍以上)。有意义的是,细胞存活关键因子Akt2(Phospho-Ser474)及其下游信号通路转录因子eIF4E(Phospho-Ser209)磷酸化水平同时降低,而Mig预处理后再热诱导,两者磷酸化水平无明显降低。(2)热诱导处理Tca8113细胞24h后,细胞出现明显的凋亡形态学改变,Mig预处理后,其细胞凋亡数量明显减少,采用Akt抑制剂MK-2206联合处理后,Tca8113细胞凋亡数量明显恢复。(3) TUNEL标记流式细胞仪检测细胞凋亡率,发现热诱导处理后Tca8113细胞凋亡率由(2.77±0.47)%升高至(33.97±1.08)%(p=0.000), Mig+热诱导联合处理后细胞凋亡率降至(17.78±2.1)%, Mig+Akt抑制剂+热诱导联合处理后细胞凋亡率恢复为(25.43±0.77)%。(4)热诱导处理后活化的Caspase-3在所有细胞中的比值由(10.93±1.17)%升高至(49.73±2.04)%(p=0.000), Mig+热诱导联合处理后降至(30.90±2.42)%,Mig+Akt抑制剂+热诱导联合处理后恢复为(44.53±1.59)%。(5)热诱导处理后Tca8113细胞JC-1单体含量由(10.3±0.92)%升高为(30.5±2.86)%(p=0.000), Mig+热诱导联合处理后降至(16.97±1.53)%, Mig+Akt抑制剂+热诱导联合处理后恢复为(25.34±1.79)%。(6) Western Blot检测发现,热诱导后Tca8113细胞磷酸化Akt2(p-Akt2)(Phospho-Ser474)相对表达量由(0.50±0.09)降为(0.10±0.04)(p=0.000), Mig+热诱导联合处理后恢复为(0.43±0.08), Mig+Akt抑制剂+热诱导联合后降至(0.27±0.04)。热诱导后Tca8113细胞磷酸化eIF4E(p-eIF4E)(Phospho-Ser209)的相对表达量由(0.45±0.05)降为(0.16±0.02)(p=0.000), Mig+热诱导联合处理后恢复为(0.39±0.04),Mig+Akt抑制剂+热诱导联合处理后降至(0.21±0.04)。热诱导后Tca8113细胞Bcl-2相对表达量由(1.20±0.06)降为(0.51±0.07)(p=0.000), Mig+热诱导联合处理后恢复为(1.30±0.12), Mig+Akt抑制剂+热诱导联合处理后为(1.03±0.10)。[结论]趋化因子Mig通过拯救Akt信号通路的活性,促进eIF4E的磷酸化,上调抗凋亡基因Bcl-2的表达,抑制热诱导口腔舌鳞癌Tca8113细胞凋亡发生,介导肿瘤细胞耐热。

全文目录


英文縮略表  5-6
摘要  6-8
Abstract  8-11
前言  11-13
材料和方法  13-22
  一、实验主要试剂及设备  13-16
  二、实验方法  16-22
结果  22-55
  一、Full moon PCS248磷酸化蛋白芯片杂交检测结果  22-36
  二、细胞形态学观察结果  36-38
  三、TUNEL标记流式细胞仪检测细胞凋亡率结果  38-41
  四、活化Caspase-3检测结果  41-44
  五、线粒体膜电位检测结果  44-47
  六、Western Blot结果  47-55
讨论  55-60
结论  60-61
参考文献  61-66
综述  66-76
  参考文献  72-76
攻读学位期间发表的论文  76-77
致谢  77

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 口腔、颌面部肿瘤 > 舌肿瘤、舌下肿瘤
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