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JR6-1诱导人肝癌细胞BEL-7402凋亡的内质网途径研究

作　者: 赵美玲
导　师: 俞仲毅
学　校: 哈尔滨商业大学
专　业: 海洋生物学
关键词: JR6-1 BEL-7402细胞 细胞凋亡 内质网应激
分类号: R735.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要


癌症己成为当下严重危害人类健康的常见疾病。传统的放、化疗治疗方法,虽然对肿瘤细胞起到了杀伤作用,但对机体也产生了很大的毒副作用,会使机体免疫功能低下和骨髓抑制等。因此,研发创新出高选择性、高特异性、低毒副作用性的抗肿瘤药物已成为了当下的研究热点。本文首先用MTT法初步筛选了10μg/mL的JR6-1、JR6、XLJG1、XLJG2、 XLJG3、XLJG5、XLJG6、XLJG7、XLJG9、XLJG10、XLJG11、XLJG13等12种化合物作用48h对HepG2(人肝癌细胞)、BEL-7402(人肝癌细胞)、A549(人肺癌细胞)、HCT-8(人结肠癌细胞)、MCF-7(人乳腺癌细胞)、BGC(人胃癌细胞)、Hela(人宫颈癌细胞)、HT-29(人结肠癌细胞)、EJ(人膀胱癌细胞)等9种肿瘤细胞株的体外增殖抑制作用,经过对其细胞抑制率的比较,筛选出增殖抑制效果最好的化合物及敏感瘤株分别为JR6-1和BEL-7402细胞,并用MTT法对JR6-1对BEL-7402细胞株的增殖抑制效果进行了进一步检验,结果显示JR6-1的IC5o为4.29μg/mL,阳性药DDP的IC50为3.03μg/mL应用流式细胞仪检测JR6-1对BEL-7402细胞凋亡率的影响,结果显示JR6-1可诱导BEL-7402细胞发生凋亡,且凋亡率随JR6-1剂量的增加而增加,与对照组相比,差异非常显著,P<0.01,具有统计学意义,JR6-1浓度为1、3、9μg/mL时,其凋亡率分别为16.3%、30%、55.5%。流式细胞仪检测JR6-1对BEL-7402细胞周期的影响,结果发现与正常对照组相比1μg/mL的JR6-1作用BEL-7402细胞48h后,G1期细胞含量有所增加,S、G2期细胞含量减少,细胞周期阻滞可能发生在G1期；而经3、9μg/mL的JR6-1处理48h后的BEL-7402细胞,S期细胞含量增加,提示细胞周期阻滞可能发生在S期。用Western Blot方法检测JR6-1作用BEL-7402细胞48h后,细胞内质网相关凋亡蛋白Bip/GRP78、CHOP、p-JNK、p-c-Jun、caspase-3表达量的变化,结果显示,经JR6-1处理48h后,BEL-7402细胞内的Bip/GRP78、CHOP、p-JNK、p-c-Jun、caspase-3蛋白的表达量均随JR6-1剂量的增加而增加,且与对照组相比,差异非常显著,P<0.01,具有统计学意义。综合以上结果说明,JR6-1可能诱导BEL-7402细胞发生了内质网应激,进而促发CHOP蛋白表达以及JNK、c-Jun蛋白的活化,诱导细胞发生凋亡。而caspase-3的表达说明JR6-1诱导BEL-7402细胞凋亡还可能通过caspase级联反应,但其具体的激活路径还有待进一步研究。

全文目录


摘要  5-6
Abstract  6-9
1 绪论  9-20
  1.1 肿瘤  9-13
    1.1.1 肿瘤概念  9
    1.1.2 肿瘤发病原因  9-11
    1.1.3 抗肿瘤药物研究新进展  11-13
  1.2 细胞凋亡  13-14
    1.2.1 细胞凋亡概念  13
    1.2.2 细胞凋亡特征  13-14
  1.3 细胞凋亡途径  14-18
    1.3.1 非caspase依赖性途径  14
    1.3.2 线粒体途径  14-15
    1.3.3 死亡受体途径  15-16
    1.3.4 内质网途径  16-18
  1.4 课题的来源及意义  18-19
    1.4.1 课题的来源  18
    1.4.2 课题的研究目的及意义  18-19
  1.5 研究内容  19-20
    1.5.1 高抗肿瘤活性化合物及敏感瘤株的筛选  19
    1.5.2 JR6-1对BEL-7402细胞凋亡率及细胞周期的影响  19
    1.5.3 JR6-1对BEL-7402细胞内质网相关凋亡蛋白表达量的影响  19-20
2 高抗肿瘤活性化合物及敏感瘤株的筛选  20-30
  2.1 引言  20
  2.2 实验部分  20-23
    2.2.1 实验材料  20-22
    2.2.2 实验方法  22-23
  2.3 实验结果  23-29
    2.3.1 MTT法初筛增殖抑制效果最好的化合物及敏感瘤株  23-28
    2.3.2 MTT法检测筛选出的化合物对敏感瘤株的体外增殖抑制作用  28-29
  2.4 本章小结  29-30
3 JR6-1对BEL-7402细胞凋亡率及细胞周期的影响  30-36
  3.1 引言  30
  3.2 实验部分  30-33
    3.2.1 实验材料  30-32
    3.2.2 实验方法  32-33
  3.3 实验结果  33-35
    3.3.1 JR6-1对BEL-7402细胞凋亡率的影响  33-34
    3.3.2 JR6-1对BEL-7402细胞周期的影响  34-35
  3.4 本章小结  35-36
4 JR6-1对BEL-7402细胞内质网相关凋亡蛋白表达量的影响  36-45
  4.1 引言  36
  4.2 实验部分  36-39
    4.2.1 实验材料  36-38
    4.2.2 实验方法  38-39
  4.3 实验结果  39-44
    4.3.1 Western Blot法检测Bip/GRP78蛋白表达  39-41
    4.3.2 Western Blot法检测CHOP、p-JNK、p-c-Jun蛋白表达  41-43
    4.3.3 Western Blot法检测caspase-3蛋白表达  43-44
  4.4 本章小结  44-45
5 讨论  45-48
  5.1 高抗肿瘤活性化合物及敏感瘤株的筛选  45
  5.2 JR6-1对BEL-7402细胞凋亡率及细胞周期的影响  45-46
  5.3 JR6-1对BEL-7402细胞内质网相关凋亡蛋白表达量的影响  46-48
6 结论  48-49
参考文献  49-56
攻读学位期间发表的论文  56-57
致谢  57

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 消化系肿瘤 > 肝肿瘤
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