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茶氨酸对肺癌血管生成影响的研究

作　者: 莫贵艳
导　师: 胡成平
学　校: 中南大学
专　业: 呼吸内科
关键词: 茶氨酸血管生成人脐静脉内皮细胞三维培养肺癌
分类号: R734.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

背景和目的：肿瘤的生长和转移依赖于新生血管的生成,肿瘤既可通过肿瘤血管获取营养和氧气,又可通过肿瘤血管源源不断地向宿主输送转移细胞,并在机体的其他部位继续生长和诱导血管形成,导致肿瘤转移。因此,以新生血管为靶点,抑制肿瘤血管生成对于抑制肿瘤生长及转移具有重要意义。血管生成的基本过程包括：血管基底膜的降解,血管内皮细胞的增殖、迁移,毛细血管管腔的形成。因此,血管内皮细胞是抗血管生成治疗的主要靶点。茶氨酸是茶叶中特有的非蛋白质氨基酸,茶氨酸可在肿瘤发生的多个环节抑制肿瘤生长,且可提高多种化疗药物的敏感性,减轻其毒副作用,且可下调肺癌移植瘤VEGF的表达。然而,茶氨酸对于内皮细胞生长及肺癌血管生成的影响尚待进一步研究。本实验拟从茶氨酸对于脐静脉内皮细胞本身增值及凋亡的影响入手,在体外构建的三维血管形成模型中研究茶氨酸对内皮细胞形成血管的影响,进一步再进行体内实验,构建裸鼠肺腺癌移植瘤模型,观察茶氨酸对肺腺癌移植瘤血管生成的影响。方法：本实验分为体外实验和体内实验2部分。体外实验中,分为6组,6种不同浓度茶氨酸[0mM(对照组),25mM,50mmM,100mmM,200mM,400mM]处理人脐静脉内皮细胞。用MTT法观察茶氨酸对内皮细胞增殖的影响,根据OD值,计算出细胞增值抑制率；用不同浓度茶氨酸处理HUVECs后收集细胞应用Annexin V FITC-PI双染法测各组细胞凋亡率；应用表面培养法构建人脐静脉内皮细胞三维培养模型,添加不同浓度茶氨酸及生长因子,计数各组形成的微血管密度。在体内实验中,将裸鼠分为2组,茶氨酸组,予以茶氨酸腹腔注射,对照组,予以等体积生理盐水腹腔注射。应用Weidner法计数瘤体的微血管密度,观察茶氨酸对A549移植瘤微血管形成的影响。结果：1)茶氨酸对内皮细胞增殖的影响：与对照组比较,HUVECs经不同浓度茶氨酸处理后,细胞生长抑制率增加。随着茶氨酸处理时间和浓度的增加,对HUVECs生长的抑制率逐渐增加。同一时间点组间比较,差异有统计学意义(P<0.001)。2)茶氨酸对内皮细胞凋亡的影响：HUVECs经不同浓度的茶氨酸处理,结果显示随着茶氨酸浓度的增加及处理时间的延长,HUVECs的凋亡率逐渐增加。同一时间点组间比较,差异有统计学意义(P<0.001)。3)茶氨酸对内皮细胞体外三维血管形成的影响：茶氨酸处理组较对照组微血管密度下降,茶氨酸处理组呈剂量依赖性的抑制。组间比较,差异有统计学意义(P<0.001)。4)茶氨酸对裸鼠A549移植瘤微血管密度的影响：茶氨酸处理组较对照组裸鼠皮下移植瘤的微血管密度明显下降,2组比较差异有统计学意义(P<0.05)结论：1.茶氨酸呈浓度依赖性地抑制内皮细胞增值,诱导内皮细胞凋亡。2.茶氨酸呈浓度依赖性地抑制内皮细胞体外血管形成。3.茶氨酸能抑制裸鼠移植瘤新生血管的形成。

全文目录

摘要  4-6
ABSTRACT  6-10
英文缩略词表  10-11
前言  11-14
第一部分茶氨酸对HUVECs细胞增殖、凋亡影响  14-20
  1.1 材料  14-15
  1.2 实验方法  15-17
  1.3 统计分析  17
  1.4 实验结果  17-20
第二部分茶氨酸对体外三维血管生成的影响  20-24
  2.1 实验材料  20-21
  2.2 实验方法  21-22
  2.3 统计方法  22
  2.4 结果  22-24
第三部分茶氨酸对肺腺癌移植瘤血管生成的影响  24-30
  3.1 材料  24-25
  3.2 实验方法  25-26
  3.3 统计方法  26
  3.4 实验结果  26-30
第四部分讨论  30-34
  4.1 茶氨酸对HUVECs增值、凋亡的影响  30
  4.2 茶氨酸对内皮细胞体外血管生成的影响  30-31
  4.3 茶氨酸对裸鼠肺腺癌移植瘤血管生成的影响  31-34
第五部分结论  34-35
参考文献  35-40
综述绿茶活性成分抗肿瘤血管生成及机制  40-50
  参考文献  45-50
致谢  50

茶氨酸对肺癌血管生成影响的研究

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