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鸡胚背根神经节体外三维培养的实验研究

作　者: 李夏
导　师: 宋跃明
学　校: 四川大学
专　业: 外科学
关键词: 鸡胚背根神经节三维培养藻酸盐琼脂糖
分类号: R318.0
类　型: 硕士论文
年　份: 2006年
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内容摘要

目的：本研究通过选取两种已被广泛应用于骨组织工程领域的藻酸钙和琼脂糖水凝胶作为细胞外基质材料，对鸡胚背根神经节（DRG）组织块进行体外三维培养，以探讨藻酸钙及琼脂糖水凝胶作为导向支架材料用于神经组织工程领域的可行性，并为上述材料的进一步改良提供必要的体外实验依据。方法（1）将2.5g藻酸钠粉末溶解于100ml摩尔浓度分别为0.135M和0.1M的氯化钠、磷酸氢二钾混合水溶液中，配置成浓度为1％（w／v）的水溶液。将高温高压灭菌后的备用。（2）分别将0.5g、0.75g、1.0g、1.25gSeaPrep^?琼脂糖粉末溶液于100mlPBS液中，制成浓度为0.5％、0.75％、1.0％、1.25％（w／v）的水溶液，采用0.22μm一次性滤器除菌后备用。（3）在超净台内，从孵育9-10天后的受精伊莎褐鸡蛋中取出鸡胚，并在解剖显微镜下，摘取鸡胚背根神经节（DRG）组织块，将其至于D-Hank’s液中。（4）分组将1％（w／v）藻酸纳及0.5％、0.75％、1.0％、1.25％（w／v）SeaPrep^?琼脂糖水溶液加入48孔培养板中，每孔200μl。（5）将摘取的鸡胚DRG组织块接种于48孔培养板中，每孔3-4枚。（6）将10％葡萄糖酸钙注射液缓慢滴入加有1％（w／v）藻酸纳水溶液的培养孔中，使Ca²⁺终浓度为20mM。形成藻酸钙水凝胶后，吸取多余的葡萄糖酸钙溶液。（7）将加有SeaPrep^?琼脂糖水溶液的培养板放入4℃冰箱中10-15分钟结胶。（8）在每个培养孔凝胶顶部加入500μl DMEM／F12培养基（其中含有10％胎牛血清，1％青霉素／链霉素）（9）将培养板置于37℃，95％湿度，5％CO₂的孵箱中培养。（10）使用倒置相差显微镜，对鸡胚DRG组织块在藻酸钙及琼脂糖水凝胶中三维培养24小时、2天、4天后的生长情况进行连续观察。培养4天后，从每个三维生长背根节

全文目录

中文摘要  4-6
英文摘要  6-9
前言  9-10
材料与方法  10-15
结果  15-18
讨论  18-23
结论  23-28
综述周围神经导向材料的研究进展  28-45
致谢  45

鸡胚背根神经节体外三维培养的实验研究

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