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激素对人骨髓间充质干细胞神经肽受体mRNA表达的影响

作　者: 张战峰
导　师: 王义生
学　校: 郑州大学
专　业: 外科学
关键词: 骨髓间充质干细胞激素神经肽降钙素基因相关肽受体 P物质受体
分类号: R681
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

背景激素引起非创伤性股骨头坏死(osteonecrosis of the femoral head,ONFH)的发病机制存在着诸多学说,近年来,神经调节因素在激素性ONFH发病中的作用日益受到人们的重视。骨组织神经参与骨代谢,其中以肽能神经与骨的关系最为紧密。肽能神经通过分泌神经肽产生生物效应,其中以降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)和P物质(substance P,SP)的作用最为明显,CGRP和SP分别作用于骨组织内各种细胞上的相应受体,调节骨修复与重建、影响骨代谢。骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)是骨生成和代谢中重要基质细胞,也是激素性ONFH发生机制中重要细胞学基础。研究发现,在BMSCs细胞表面存在着CGRP和SP的相应受体,即降钙素基因相关肽受体CGRPR和P物质受体SPR,神经肽通过作用于CGRPR和SPR,影响BMSCs内物质表达与代谢。目的体外分离培养人骨髓间充质干细胞(BMSCs),观察激素对BMSCs细胞内神经肽受体CGRPR、SPR以及过氧化物酶体增殖子活化受体γ (peroxisome proliferators-activated receptor y,PPARγ)、成骨转录因子Runx2等基因mRNA表达的影响,探索神经肽在激素性ONFH所起到的作用及作用机制。方法密度梯度离心联合贴壁分选法体外分离培养BMSCs,倒置相差显微镜下观察细胞形态。流式细胞仪鉴定细胞表面标志物后,传至第3代随机分为两组,实验组细胞给予10-7mol/L地塞米松干预9d,对照组正常培养。观察细胞形态、生长趋势,绘制细胞生长曲线,油红O染色脂肪细胞,实时荧光定量-聚合酶链反应技术(RT-qPCR)分析CGRPR、SPR、PPARy、Runx2等的mRNA表达的变化。结果1.分离培养的贴壁细胞呈梭形、纤维细胞样,漩涡样、放射状生长,流式细胞仪分析CD29、CD44表达率(91.4±0.7)%、(93.8±0.5)%,CD34表达率(2.7±0.8)%,符合BMSCs生物学特性,说明所获得的贴壁细胞是BMSCSo2.生长曲线显示,实验组地塞米松干预后细胞生长缓慢,对照组细胞增殖旺盛。油红O染色证明,实验组BMSCs细胞内出现脂滴,向脂肪细胞方向大量分化,对照组未见细胞内脂滴出现。3.实验组CGRPR mRNA、SPR mRNA、Runx2mRNA的表达显著降低,下降率分别为0.10±0.03、0.16±0.04、0.23±0.05(P均<0.01),以CGRPR mRNA下降最为明显,两组相比,实验组CGRPR mRNA表达量仅占对照组的10%。实验组PPARy mRNA表达明显上调,实验组PPARy mRNA表达量较照组升高5.08±3.37倍,差异有统计学意义(P<0.01)。结论1.激素能够诱导BMSCs大量分化为脂肪细胞,在成脂分化过程中,,PPARγmRNA表达升高,重要成骨转录因子Runx2mRNA表达降低。2.激素能下调BMSCs细胞中神经肽受体CGRPR mRNA、SPR mRNA的表达,抑制细胞生长增殖、成骨分化,骨修复能力不足,这可能与激素性ONFH的发生机制有关。

全文目录

摘要  4-6
Abstract  6-9
目录  9-10
縮略词表  10-11
前言  11-12
材料与方法  12-19
结果  19-21
附图  21-24
讨论  24-32
结论  32-33
参考文献  33-36
综述  36-67
  参考文献  59-67
个人简历及在读期间发表的学术论文  67-68
致谢  68

激素对人骨髓间充质干细胞神经肽受体mRNA表达的影响

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