学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

青钱柳多糖对3T3-L1脂肪细胞CAP、ATGL、FTO和HMG-CoA表达的影响

作　者: 傅凌韵
导　师: 王文君; 江勇
学　校: 江西农业大学
专　业: 食品工程
关键词: 青钱柳多糖 3T3-L1脂肪细胞 FTO ATGL HMG-CoA CAP
分类号: R589.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
下　载: 20次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

在世界范围内，肥胖症已经成为一个主要的公共健康问题，它会导致糖尿病、高血压、心脏疾病以及其他健康问题。这就除了需要更多的临床降脂药物外，还需更多开发具有降脂效用的食品。而青钱柳叶被誉为“神茶”，近年来已有一些研究发现具有显著降糖降脂作用。现本文以青钱柳叶中提取纯化出的不同青钱柳多糖组分为研究对象，通过体外试验探讨青钱柳多糖降血脂作用。采用Q-PCR法检测青钱柳多糖各组分对3T3-L1脂肪细胞中的原癌基因c-Cbl相关蛋白(CAP)、甘油三酯脂肪酶(ATGL)和3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶（HMG-CoA）基因表达的影响。采用Western-blot法检测青钱柳多糖不同组分对3T3-L1脂肪细胞中的脂肪量和肥胖相关基因（FTO）、甘油三酯脂肪酶(ATGL)和3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶（HMG-CoA）蛋白表达的影响。主要试验结果如下：（1）通过对脂肪细胞内形成的脂滴进行油红O染色并测定细胞内甘油三酯的含量探讨青钱柳多糖对3T3-L1前脂肪细胞增殖分化影响，结果表明，青钱柳多糖对3T3-L1前体脂肪细胞分化影响较小。（2）基因表达的结果表明，青钱柳多糖作用四天后各组分脂肪细胞中CAPmRNA表达显著提高；青钱柳多糖组分Ⅰ、Ⅱ都能极显著提高3T3-L1前脂肪细胞ATGL mRNA表达水平，青钱柳多糖组分Ⅲ、Ⅳ在作用八天时能显著提高ATGLmRNA表达水平；青钱柳多糖组分Ⅰ能极显著降低3T3-L1前脂肪细胞HMG-CoAmRN表达水平；青钱柳多糖组分Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ在作用四天时都能显著降低3T3-L1前脂肪细胞中HMG-CoA mRN表达水平。（3）蛋白表达的结果表明，青钱柳多糖作用四天后，青钱柳多糖组分Ⅰ作用后3T3-L1脂肪细胞中FTO蛋白表达量下降；青钱柳多糖组分Ⅰ和Ⅲ对3T3-L1脂肪细胞作用八天时，FTO蛋白的表达显著或极显著减少；青钱柳多糖各组分都能使ATGL蛋白表达量显著或极显著的提高；随着时间的增加，青钱柳多糖组分Ⅰ各实验组细胞及组分Ⅳ中浓度为30μg/ml时，HMG-CoA蛋白表达量显著下降，青钱柳多糖组分Ⅱ和Ⅲ则无统计学上差异，但与空白组相比，青钱柳多糖作用四天和八天后各青钱柳多糖组分实验细胞中HMG-CoA蛋白表达显著提高或无统计学上的差异。

全文目录

摘要  5-6
Abstract  6-7
第一章文献综述  7-16
  1 青钱柳多糖的研究进展  7-8
  2 3T3-L1 前脂肪细胞的研究进展  8-9
  3 3T3-L1 前脂肪细胞相关基因  9-15
    3.1 脂肪量和肥胖相关基因（FTO）  9-11
    3.2 甘油三酯脂肪酶（ATGL）  11-12
    3.3 3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶 A 还原酶（HMG-CoA）  12-14
    3.4 原癌基因 c-Cbl 相关蛋白(CAP)  14-15
  4 课题来源及研究目的与意义  15-16
    4.1 课题来源  15
    4.2 研究目的及意义  15-16
第二章青钱柳多糖对 3T3-L1 前脂肪细胞增殖分化的影响  16-23
  1 材料与方法  16-17
    1.1 实验材料  16
    1.2 主要试剂  16
    1.3 主要仪器  16-17
  2 实验方法  17-18
    2.1 青钱柳多糖样品的制备  17
    2.2 3T3-L1 前脂肪细胞增殖分化及检测  17-18
      2.2.1 MTT 法检测 3T3-L1 前脂肪细胞增殖  17
      2.2.2 油红 O 染色法检测 3T3-L1 前脂肪细胞分化  17-18
    2.3 数据统计方法  18
  3 结果与分析  18-22
    3.1 油红 O 染色结果  18-19
    3.2 脂肪细胞内甘油三酯测定结果  19-22
  4 讨论  22
  5 小结  22-23
第三章青钱柳多糖对 3T3-L1 前脂肪细胞相关基因表达的影响  23-37
  1 材料和试剂  23-24
    1.1 试验材料  23
    1.2 主要试验试剂  23
    1.3 主要试验仪器  23
    1.4 试验试剂配制  23-24
  2 实验方法  24-26
    2.1 3T3-L1 前脂肪细胞总 RNA 提取  24
    2.2 逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）  24-26
      2.2.1 逆转录（合成 cDNA）  24-25
      2.2.3 荧光定量 PCR  25
      2.2.4 PCR 反应条件  25-26
      2.2.5 PCR 扩增及电泳  26
  3 结果与分析  26-34
    3.1 3T3-L1 脂肪细胞中总 RNA 提取纯度及完整性检测  26
    3.2 3T3-L1 脂肪细胞各基因表达受青钱柳多糖的影响情况  26-34
      3.2.1 3T3-L1 脂肪细胞 CAP mRNA 表达受青钱柳多糖的影响情况  26-29
      3.2.2 3T3-L1 脂肪细胞 ATGL mRNA 表达受青钱柳多糖的影响情况  29-31
      3.2.3 3T3-L1 脂肪细胞 HMG-CoA mRNA 表达受青钱柳多糖的影响情况  31-34
  4 讨论  34-35
  5 小结  35-37
第四章青钱柳多糖对 3T3-L1 脂肪细胞蛋白表达的影响  37-51
  1 材料与试剂  37-38
    1.1 试验材料  37
    1.2 主要试验试剂  37
    1.3 主要试验仪器  37-38
    1.4 试验试剂配制  38
  2 实验方法  38-42
    2.1 各实验组 3T3-L1 脂肪细胞中蛋白质提取  38-39
    2.2 蛋白质含量测定  39
    2.3 蛋白电泳及完整性检测  39-41
      2.3.1 配胶及灌胶  39-40
      2.3.2 样品蛋白变性与上样  40
      2.3.3 电泳  40
      2.3.4 剥胶  40
      2.3.5 银染色确定蛋白完整性  40-41
    2.4 湿法转膜  41-42
    2.5 转膜检测  42
    2.6 免疫检测  42
    2.7 凝胶成像分析及数据分析  42
  3 结果与分析  42-49
    3.1 总蛋白提取纯度及完整性检测  42-43
    3.2 青钱柳多糖对 3T3-L1 脂肪细胞各蛋白表达的影响  43-49
      3.2.1 青钱柳多糖对 3T3-L1 脂肪细胞 FTO 蛋白表达的影响  43-45
      3.2.2 青钱柳多糖对 3T3-L1 脂肪细胞 ATGL 蛋白表达的影响  45-47
      3.2.3 青钱柳多糖对 3T3-L1 脂肪细胞 HMG-CoA 表达的影响  47-49
  4 讨论  49-50
  5 小结  50-51
结论  51-53
  1 本实验获得的初步成果  51
  2 本研究存在的问题及展望  51-53
参考文献  53-58
致谢  58-59
附录  59-60

青钱柳多糖对3T3-L1脂肪细胞CAP、ATGL、FTO和HMG-CoA表达的影响

内容摘要

全文目录

相似论文