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阴道毛滴虫病毒载体介导的锤头状核酶对Rab11C基因表达的影响

作　者: 刘畅
导　师: 张西臣
学　校: 吉林大学
专　业: 预防兽医学
关键词: 阴道毛滴虫 阴道毛滴虫病毒 锤头状核酶 Rab11C基因
分类号: R382.21
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要


阴道毛滴虫（Trichomonas vaginalis, Donne1837）是寄生在人体阴道和泌尿道的鞭毛虫，主要引起滴虫性阴道炎和尿道炎。阴道毛滴虫病是全球性最广泛流行的非病毒性性转播疾病之一，每年大约有1.7亿人感染此病。尽管阴道毛滴虫感染率较高，但是关于阴道毛滴虫的致病机制、免疫原性、毒理等方面的报道较少。阴道毛滴虫病毒（Trichomonas vaginalis virus，TVV）属原虫病毒，专性寄生于阴道毛滴虫体内。阴道毛滴虫病毒与阴道毛滴虫的致病性、毒力、抗药性等有一定关系。阴道毛滴虫病毒载体的成功构建使外源基因的导入得以实现，为蛋白质功能研究提供了新方法。本课题组已利用iTRAQ技术，比较分析阴道毛滴虫携病毒株滋养体与无病毒株滋养体的差异蛋白，找到了差异蛋白Rab11C蛋白。Rab11是Ras小分子GTP酶超家族的成员，目前研究证实Ras GTP酶作为重要调节因子，调节对阴道毛滴虫的致病过程中的形态变化起着至关重要的作用的G蛋白。嵌合型锤头状核酶的构建及其对Rab11C基因体外转录体切割本试验用肝浸汤培养基对阴道毛滴虫携病毒及无病毒株进行体外纯培养。将包含Rab11C的锤头状核酶插入到阴道毛滴虫病毒载体中，构建了阴道毛滴虫病毒载体介导的嵌合型锤头状核酶pNME/RL和pNME/RS。体外试验表明pNME/RL和pNME/RS体外转录体对Rab11C体外转录体起到有效切割，切割效率分别为82.12%和80.20%，而作为对照的pNME/RA对Rab11C基因体外转录体的切割效率仅为32.69%，为进行体内试验提供了理论基础。核酶对Rab11C基因表达抑制及对阴道毛滴虫病毒和虫体本身的影响将锤头状核酶pNME/RL和pNME/RS经电穿孔的方法转染到阴道毛滴虫体内，荧光定量PCR检测在体内pNME/RL和pNME/RS对Rab11C基因切割效率分别可达到82%和73%。通过显微镜观察及虫体计数的方法检测其对虫体的影响，对虫体计数显示，阴道毛滴虫滋养体在转染后，转染虫体的数量少于对照组虫体数，显微镜观察显示转染后虫体变形，活力减退，表明Rab11C基因对虫体的生长、形态有一定影响。通过荧光定量PCR检测其对阴道毛滴虫病毒基因表达的影响，在转染后21d内，阴道毛滴虫病毒表达量有所下调。本试验成功构建了阴道毛滴虫病毒载体介导的嵌合型锤头状核酶pNME/RL和pNME/RS，探讨Rab11C基因对阴道毛滴虫病毒以及虫体本身的影响，为阴道毛滴虫病毒载体在阴道毛滴虫分子生物学等领域的研究奠定了基础，为诊断及防治阴道毛滴虫病提供了新的方向。

全文目录


中文摘要  4-7
Abstract  7-14
引言  14-15
第一篇 文献综述  15-40
  第1章 阴道毛滴虫的研究进展  15-32
    1.1 阴道毛滴虫的进化背景、生活史及形态特点  15-16
    1.2 阴道毛滴虫病的流行病学及症状  16-18
    1.3 阴道毛滴虫的致病机制  18-19
    1.4 阴道毛滴虫的功能性基因  19-23
    1.5 阴道毛滴虫的诊断  23-28
    1.6 阴道毛滴虫病的防治  28-32
  第2章 阴道毛滴虫病毒的研究进展  32-40
    2.1 阴道毛滴虫病毒  32-37
    2.2 基因转染  37-38
    2.3 阴道毛滴虫病毒载体  38-40
第二篇 研究内容  40-86
  第1章 阴道毛滴虫病毒载体介导的嵌合型锤头状核酶的构建  40-58
    1.1 材料与方法  40-48
    1.2 结果  48-54
    1.3 讨论  54-56
    1.4 小结  56-58
  第2章 阴道毛滴虫病毒载体介导的嵌合型锤头状核酶对 Rab11C基因体外切割  58-66
    2.1 材料与方法  58-61
    2.2 结果  61-63
    2.3 讨论  63-64
    2.4 小结  64-66
  第3章 阴道毛滴虫病毒载体介导的嵌合型锤头状核酶对 Rab11C基因表达抑制  66-76
    3.1 材料与方法  66-69
    3.2 结果  69-72
    3.3 讨论  72-74
    3.4 小结  74-76
  第4章 抑制 Rab11C基因表达对阴道毛滴虫病毒及虫体本身的影响  76-86
    4.1 材料与方法  76-80
    4.2 结果  80-83
    4.3 讨论  83-84
    4.4 小结  84-86
结论  86-87
参考文献  87-107
攻读硕士期间的科研成果  107-109
导师及作者简介  109-113
致谢  113

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中图分类: > 医药、卫生 > 基础医学 > 医学寄生虫学 > 医学原虫学 > 鞭毛虫 > 毛滴虫、梨形鞭虫
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