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阴道毛滴虫内双链RNA病毒的寄生及其对阴道毛滴虫相关特性影响的研究

作　者: 王丽娟
导　师: 薛长贵
学　校: 郑州大学
专　业: 病原生物学
关键词: 阴道毛滴虫阴道毛滴虫病毒甲硝唑人型支原体基因多态性
分类号: R711.3
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的对我国河南地区阴道毛滴虫临床分离株进行阴道毛滴虫病毒的检测。研究阴道毛滴虫病毒的寄生对阴道毛滴虫的临床致病性、甲硝唑耐药性、与人型支原体的共生及基因多态性的影响。方法1.将收集到的30株阴道毛滴虫分离株在无菌TYM (trypticase-yeast extract-maltose)培养基中37℃培养,达到纯培养后,用同时提取DNA和RNA的方法提取虫体的总核酸,1%的琼脂糖凝胶对其进行电泳分析,初步筛选阴道毛滴虫病毒阳性株。将已提取的阴道毛滴虫病毒阳性株总核酸与核酸酶进行反应,再进行1%的琼脂糖凝胶电泳分析鉴定。2.对收集到的阴道毛滴虫病患者的临床症状进行分析,根据无症状、轻度症状、中度症状、重度症状四级分法,判定阴道毛滴虫病毒阳性株和阴性株临床症状的轻重程度。用两样本秩和检验的方法对所得数据进行处理,研究阴道毛滴虫病毒对滴虫的临床致病性有无影响。3.用连续稀释法测量30株阴道毛滴虫临床分离株的甲硝唑最小致死浓度(minimum lethal concentration, MLC)，对比阴道毛滴虫病毒阳性株和阴性株最小致死浓度,所得数据用SPSS16.0进行处理,分析阴道毛滴虫病毒对甲硝唑耐药性有无影响。4.用阴道毛滴虫人型支原体扩增的特异性引物,对30株阴道毛滴虫分离株进行人型支原体的检测,分析阴道毛滴虫病毒的寄生是否影响人型支原体与阴道毛滴虫的共生。5.用阴道毛滴虫Tvmarl基因位置扩增的特异性引物,通过MGE-PCR方法对30株阴道毛滴虫临床分离株进行Tvmarl的位置扩增,应用MEGA 5.0软件进行系统进化图谱绘制,分析虫体的基因多态性。结果1.30株阴道毛滴虫分离株总核酸进行电泳,其中有6株(Tv5、Tv10、Tv13、Tv17、Tv22、Tv23)滴虫除了有基因组DNA,还有一条5.5 kbp的病毒带,为阴道毛滴虫病毒阳性株。2.阴道毛滴虫病毒阳性株的临床致病性轻于阴道毛滴虫病毒阴性株(Zc=-3.428,P<0.05)。3.阴道毛滴虫病毒阳性组的甲硝唑MLC值(5.68±3.588)μg/ml小于阴道毛滴虫病毒阴性组的甲硝唑MLC值(24.27±20.899)μ/ml,两者差异具有统计学意义(t＝2.143,P<0.05),阴道毛滴虫病毒阳性株对甲硝唑比较敏感。4.人型支原体不易与有阴道毛滴虫病毒寄生的阴道毛滴虫株共生(χ2=0.000,P<0.05)。5. 30株阴道毛滴虫临床分离株Tvmarl基因位置扩增结果显示阴道毛滴虫基因具有明显的多态性,所做系统进化树显示6株阴道毛滴虫阳性株遗传关系比较密切。结论1.在我国河南地区阴道毛滴虫临床分离株中检测到阴道毛滴虫病毒的寄生,寄生率为20%。2.阴道毛滴虫病毒阳性虫株引起的临床症状较轻,对甲硝唑比较敏感,不易与人型支原体共生,病毒还会影响虫体的基因多态性。

全文目录

摘要  4-6
Abstract  6-11
符号说明  11-12
1 前言  12-20
  1.1 概述  12
  1.2 阴道毛滴虫的营养需求及其培养  12-13
  1.3 阴道毛滴虫病的发病机理  13-14
  1.4 阴道毛滴虫病的临床表现  14-15
  1.5 阴道毛滴虫病的诊断方法  15-16
  1.6 阴道毛滴虫病的治疗及虫体的耐药机制  16-17
  1.7 人型支原体与阴道毛滴虫的共生  17-18
  1.8 阴道毛滴虫病毒  18-19
  1.9 研究内容和目的  19-20
2 材料方法  20-30
  2.1 阴道毛滴虫分离株采集  20
  2.2 实验试剂和仪器  20-23
  2.3 阴道毛滴虫培养基的配制  23-24
  2.4 阴道毛滴虫的无菌培养  24
  2.5 阴道毛滴虫基因组DNA和RNA的提取  24
  2.6 阴道毛滴虫病毒株筛选与鉴定  24-25
  2.7 阴道毛滴虫甲硝唑最小致死浓度测定  25-26
  2.8 阴道毛滴虫DNA提取  26
  2.9 阴道毛滴虫DNA定性定量检测  26
  2.10 阴道毛滴虫PCR扩增反应  26-28
  2.11 阴道毛滴虫病患者临床症状的资料收集  28-29
  2.12 数据分析  29-30
3 结果  30-43
  3.1 阴道毛滴虫病毒的检测  30-32
  3.2 阴道毛滴虫病患者的临床症状  32-34
  3.3 阴道毛滴虫甲硝唑最小致死浓度的测量  34-35
  3.4 阴道毛滴虫人型支原体检测  35-36
  3.5 Tvmarl基因位置多态性结果  36-43
4 讨论  43-48
  4.1 阴道毛滴虫病毒在阴道毛滴虫体内的寄生  43-44
  4.2 阴道毛滴虫病毒对虫体临床致病性的影响  44-45
  4.3 阴道毛滴虫病毒对虫体耐药性的影响  45
  4.4 阴道毛滴虫病毒寄生对人型支原体共生的影响  45-46
  4.5 阴道毛滴虫病毒对虫体基因多态性的影响  46-48
5 结论  48-49
参考文献  49-55
阴道毛滴虫病毒的研究进展  55-68
  参考文献  65-68
个人简历  68-69
致谢  69

阴道毛滴虫内双链RNA病毒的寄生及其对阴道毛滴虫相关特性影响的研究

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