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主动免疫肾上腺素能受体肽苗对大白鼠、小白鼠和绵羊生长及血清生化指标的影响

作　者: 杨斌
导　师: 陈勇
学　校: 新疆农业大学
专　业: 动物营养与饲料科学
关键词: α2A-AR β2-AR 肽苗诱导表达免疫
分类号: S826.92
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

本试验,通过原核表达制备绵羊α2A-AR.β2-AR第二外环肽,主动免疫大白鼠、小白鼠和绵羊后测定对生产性能、屠宰指标、血清生化指标的影响。主要研究工作如下：肾上腺素能受体肽苗的制备以DNA重组技术构建绵羊a2A-肾上腺素能受体(α2A-AR)和β2-肾上腺素能受体(β2-AR)第二外环肽表达载体,以IPTG诱导其在大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中表达,为制备廉价的肾上腺素能受体肽苗提供基础。结果表明,重组绵羊α2A-AR、β2-AR第二细胞外环分子量与预期的25.3、27.39KDa相符合。在诱导0、30、60、90和120min后重组绵羊α2A-AR第二细胞外环肽占细菌总蛋白的比例分别为0%、25.0%、46.7%、61.7%和60.5%；重组绵羊β2-AR第二细胞外环肽占细菌总蛋白的比例分别为0%、26.4%、40.3%、59.2%和60.0%。经亲和层析纯化后重组绵羊α2A-AR、β2-AR第二细胞外环肽分别占总蛋白的97.4%、97.7%。主动免疫肾上腺素能受体对大白鼠生长及血液理化指标的影响选择80只体重124g左右的雌性SD大白鼠,随机分成5组(每组n=16),分别为对照组、口服β2-AR激动剂盐酸克伦特罗3mg/kg(CL组)、主动免疫重组绵羊。2A-AR肽苗(α2A-AR组)、β2-AR肽苗(β2-AR组)和化学合成β2-AR肽苗(SP组)。免疫组在第一周初次免疫相应的抗原(70μg/只),第三周加强免疫(35μg/只)。激动剂组从试验开始第三周添加激动剂(3mg/kg饲料)。对照组和激动剂组分别在第一周和第三周免疫等体积的生理盐水。大白鼠自由采食和饮水,每周断料12h并称取体重,至第七周末结束。试验结果表明,重组肽苗均可刺激机体产生较高水平的抗体水平,但合成肽的抗体水平偏低。主动免疫基因工程疫苗或化学合成肽苗对大白鼠体重、屠宰性能均无影响(P<0.05)。CL组与对照组相比腹脂/活重降低76.74%(P<0.05),TG降低28.13%(P<0.05)；β2-AR组TG、TC分别比对照组升高34.15%(P<0.05)、22.94%(P<0.05)；SP组GLU比对照组升高35.45%(P<0.05),TC升高20.59%(P<0.05)。主动免疫肾上腺素能受体对小白鼠生长及血液理化指标的影响选择100只体重22g左右的雌性昆明小白鼠,随机分成5组(每组n=20),分别为对照组、CL组、α2A-AR组、β2-AR组和SP组。免疫组在第一周初次免疫相应的抗原(30μg／只),第三周加强免疫(15μg／只)。激动剂组从试验开始第三周添加激动剂(3mg/kg饲料)。对照组和激动剂组分别在第一周和第三周免疫等体积的生理盐水。试验期间,大白鼠自由采食和饮水,每周断料12h并称取体重,至第七周末结束。试验结果表明,CL组屠宰率显著高于其它各组(p<0.05),肠系膜脂肪占活重的百分比显著低于其它各组(p<0.05),腿肌占活重的百分比显著高于其它各组(p<0.05),TG比对照组降低17.69%(P>0.05),LDL-C比对照组降低12.35%(P>0.05)；α2A-AR组、β2-AR组和SP组对大白鼠采食、体重和屠宰性能无影响；α2A-AR组和SP组的LDL-C分别比对照组降低19.74%(P<0.05)、12.35%(P>0.05)。主动免疫肾上腺素能受体对绵羊生长及血液理化指标的影响选取12只体重31kg左右雄性阿勒泰羊,随机分为对照组和β2-AR组2组。1d免疫,15d后加强免疫。自由采食和饮水,每15d称重,空腹颈静脉采血15min/次,4次。先精后粗采食1h后静脉采血15min/次,4次。90d所有动物屠宰称量胴体,血清用于测定抗体水平和生化指标。试验结果表明,β2-AR肽苗对采食、增重和饲喂后的血清生化指标均无影响;15d饲喂前β2-AR组GLU比对照组升高21.74%(P<0.05),60d饲喂前β2-AR组LDL-C比对照组降低15.19(p<0.05);β2-AR组屠宰率比对照组高4.60%(P<0.05)。以上结果显示：大白鼠、小白鼠和绵羊主动免疫肾上腺素能受体肽苗后可产生抗体,不影响大白鼠、小白鼠和绵羊的生长、采食量和脂肪沉积,但可提高绵羊的屠宰率。

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摘要  4-6
ABSTRACT  6-12
第1章文献综述  12-20
  1.1 免疫中和  12-15
    1.1.1 生长抑素  12-14
    1.1.2 胆囊收缩素  14
    1.1.3 脂肪细胞膜  14-15
  1.2 受体免疫  15-19
    1.2.1 受体免疫激活  15-17
    1.2.2 受体免疫抑制  17-19
  1.3 总结  19-20
第2章重组绵羊α_(2A)-AR、β_2-AR第二外环肽在大肠杆菌中表达及肽苗的制备  20-31
  2.1 试验材料  20-21
    2.1.1 菌种  20
    2.1.2 主要仪器  20-21
    2.1.3 主要试剂  21
  2.2 试验方法  21-25
    2.2.1 试剂配制  21-23
    2.2.2 重组绵羊α_(2A)-AR、β_2-AR第二外环肽在大肠杆菌中表达及纯化  23-25
  2.3 试验结果与分析  25-28
    2.3.1 重组绵羊α_(2A)-AR第二外环肽的诱导表达  25-26
    2.3.2 重组绵羊β_2-AR第二外环肽的诱导表达  26-27
    2.3.3 重组绵羊α_(2A)-AR、β_2-AR第二外环肽纯化  27-28
  2.4 讨论  28-30
  2.5 小结  30-31
第3章主动免疫肾上腺素能受体肽苗对大白鼠、小白鼠和绵羊生长及血清生化指标的影响  31-53
  3.1 试验材料与方法  31-36
    3.1.1 试验动物  31
    3.1.2 主要仪器  31-32
    3.1.3 主要试剂  32-33
    3.1.4 大白鼠和小白鼠免疫肾上腺素能受体肽苗  33-34
    3.1.5 绵羊免疫重组绵羊β_2-AR第二外环肽  34-35
    3.1.6 样品测定  35-36
  3.2 试验结果与分析  36-49
    3.2.1 主动免疫肾上腺素能受体肽苗对大白鼠的影响  36-40
    3.2.2 主动免疫肾上腺素能受体肽苗对小白鼠的影响  40-43
    3.2.3 主动免疫肾上腺素能受体肽苗对阿勒泰羊的影响  43-49
  3.3 讨论  49-52
    3.3.1 主动免疫肾上腺素能受体肽苗对大白鼠、小白鼠及阿勒泰羊血清抗体水平和生化指标的影响  49-50
    3.3.2 主动免疫肾上腺素能受体肽苗对大白鼠、小白鼠及绵羊生长性能和屠宰的影响  50-52
  3.4 小结  52-53
第4章全文总结论  53-54
参考文献  54-60
致谢  60-61
作者简介  61

主动免疫肾上腺素能受体肽苗对大白鼠、小白鼠和绵羊生长及血清生化指标的影响

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