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苦瓜皂甙的提取纯化及功能性研究
作 者: 刘佳璐
导 师: 王常青
学 校: 山西大学
专 业: 生药学
关键词: 苦瓜皂甙 提取分离 免疫 预防肿瘤
分类号: R285.5
类 型: 硕士论文
年 份: 2011年
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内容摘要
苦瓜既是人们常吃的蔬菜,又是一种具有清热解凉、性味苦寒、减肥美容、滋养强壮等功效的药用植物。苦瓜中的营养成分包括皂甙、多糖、生物碱、氨基酸、苦瓜肽等,国内外研究证明,苦瓜皂甙具有降血糖、提高免疫力、消炎抑菌、抗肿瘤等生物活性。本文以苦瓜干粉为研究对象,通过提取、分离纯化,得到一种以皂甙为主要成分的苦瓜提取物,并以该提取物为原料进行体内和体外功能试验,探讨了苦瓜提取物预防肿瘤的保健作用。本论文的研究内容:1、采用果胶酶+纤维素酶复合水解苦瓜细胞破壁,得到了最佳的酶解条件:在固液比1:15,纤维素酶600 u/g,50℃和pH 4.5下提取5 h;然后加果胶酶,在50℃、pH 4.0提取6 h。用该工艺得到的提取物皂甙纯度达到13.10%,多糖含量为12.82%。经成分分析比较发现,复合酶水解工艺的提取物中皂甙纯度均明显高于乙醇提取。并经紫外光谱分析定性分析,提取物中既含有三萜类皂甙又含有甾体类皂甙。2、发酵除糖:苦瓜提取物中除了皂甙成分外,还有很多杂质,如蛋白质、脂肪、还原糖、多糖和色素等物质。采用生物发酵的方法除掉还原糖类物质,它占提取物的含量较高,再经粗滤、微滤和超滤,获得皂甙含量较高的苦瓜提取物,最后大孔树脂纯化使皂甙纯度在60%以上。3、免疫作用研究:通过用动物试验来评价苦瓜皂甙提取物对小鼠免疫力功能体液免疫、细胞免疫、非特异性免疫功能的影响,结果表明灌胃苦瓜皂甙后,800mg/kg-d和1200mg/kg-d剂量对小鼠免疫功能有显著的增强作用。4、抗肿瘤作用:体内试验结果表明,苦瓜提取物能抑制S180肿瘤细胞的生长和增殖,在1200mg/kg-d剂量下抑瘤率达到60%以上,且苦瓜组的白细胞数目也显著多于模型组;荷瘤小鼠皮肤癌的灌胃苦瓜提取物的各组,其平均荷瘤数、肿瘤发生率和诱发率,均较模型组组有明显减少,在800mg/kg-d和1200mg/kg-d剂量时,可显著抑制小鼠乳头状瘤的发生,且抑制率和白细胞数都明显高于模型组;通过测定谷丙转氨酶和谷草转氨酶的酶活力,各个剂量组无明显差异,对化学性肝损伤效果不佳。5、减肥作用的研究:采用体外法通过苦瓜皂甙对胰脂肪酶和胰淀粉酶的抑制作用,来评价其减肥效果。测定结果表明,苦瓜提取液浓度为10mg/mL时,对胰脂肪酶和胰淀粉酶的抑制率分别是36%和26.7%,说明其有抑制两种酶催化水解的功能。
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全文目录
中文摘要 11-12 ABSTRACT 12-14 第一章 绪论 14-24 1.1 苦瓜的生物学性质 14-15 1.2 苦瓜的营养成分研究概况 15-17 1.2.1 苦瓜果实中的蛋白质、氨基酸与多肽 15 1.2.2 苦瓜果实中的维生素类 15-16 1.2.3 苦瓜果实中的矿物质 16 1.2.4 糖类 16 1.2.5 苦瓜甙类 16 1.2.6 苦瓜果实中的甾醇类物质 16-17 1.2.7 其它活性成分 17 1.2.8 苦瓜籽的活性成分 17 1.3 苦瓜的药理研究进展 17-19 1.3.1 免疫调节作用 17-18 1.3.2 抗生育作用 18 1.3.3 抗菌作用 18 1.3.4 降血糖作用 18 1.3.5 抗肿瘤作用 18-19 1.3.6 苦瓜素的堕胎作用 19 1.3.7 毒性及其它作用 19 1.4 苦瓜皂甙的研究现状 19-23 1.4.1 苦瓜皂甙的性质和结构 19-21 1.4.2 苦瓜皂甙提取纯化工艺的研究进展 21-22 1.4.3 苦瓜提取物药理功能研究 22-23 1.5 本研究的主要内容和目的 23-24 1.5.1 研究内容 23 1.5.2 研究目的 23-24 第二章 苦瓜皂甙提取方法的研究 24-30 2.1 试验材料与仪器 24 2.1.1 主要试剂与材料 24 2.1.2 主要仪器与设备 24 2.2 研究方法 24-26 2.2.1 工艺路线 24 2.2.2 正交试验方案 24-25 2.2.3 酶活测定方法 25 2.2.4 皂甙测定 25-26 2.2.5 苦瓜提取物中其它成分的测定 26 2.3 结果与讨论 26-28 2.3.1 酶法破壁苦瓜细胞的生物酶的选择 26 2.3.2 最佳酶解条件的研究 26-27 2.3.3 复合酶法提取苦瓜皂甙正交试验结果 27-28 2.3.4 苦瓜皂甙粗提物中皂甙、多糖、还原糖、脂肪、灰分和蛋白质等成分的分析 28 2.3.5 不同工艺提取物的紫外光谱分析 28 2.4 本章小结 28-30 第三章 苦瓜皂甙分离纯化研究 30-37 3.1 试验材料与仪器 30 3.2 试验方法 30-34 3.2.1 生物发酵法 30-31 3.2.2 发酵液的净化与超滤法 31-32 3.2.3 大孔树脂吸附法 32-34 3.3 结果与讨论 34-36 3.3.1 苦瓜粗提物的提纯方法及工艺分析 34 3.3.2 苦瓜粗提物发酵脱糖 34 3.3.3 苦瓜粗提物超滤净化 34 3.3.4 大孔树脂静态筛选试验结果 34-35 3.3.5 动态解吸洗脱液浓度的确定 35-36 3.3.6 动态解吸洗脱液用量的确定 36 3.3.7 流速对解吸率的确定 36 3.4 本章小结 36-37 第四章 苦瓜皂甙提取物的功能性研究 37-54 4.1 苦瓜皂甙体外减肥试验研究 37-38 4.1.1 试验材料与仪器 37 4.1.2 试验方法 37-38 4.1.3 结果与讨论 38 4.2 苦瓜皂甙提取物对免疫功能的研究 38-42 4.2.1 试验材料与仪器 38-39 4.2.2 试验方法 39-40 4.2.3 结果与讨论 40-42 4.3 苦瓜皂甙提取物抗S_(180)肿瘤的作用研究 42-46 4.3.1 试验材料与仪器 42-43 4.3.2 试验方法 43-44 4.3.3 结果与讨论 44-46 4.4 苦瓜皂甙提取物对乳头瘤的预防作用研究 46-50 4.4.1 试验材料与仪器 47 4.4.2 试验方法 47-48 4.4.3 结果与讨论 48-50 4.5 苦瓜皂甙提取物抑制亚硝胺物质对肝肿瘤的作用研究 50-53 4.5.1 试验材料与仪器 50-51 4.5.2 试验方法 51 4.5.3 结果与讨论 51-53 4.5 本章小结 53-54 参考文献 54-57 攻读学位期间取得的成果 57-58 致谢 58-59 个人简介及联系方式 59-61
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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药药理学 > 中药实验药理
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