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卵黄蛋白多肽的制备及其抗氧化活性研究

作　者: 秦嘉炎
导　师: 岳喜庆
学　校: 沈阳农业大学
专　业: 食品科学
关键词: 卵黄蛋白多肽酶解分离纯化抗氧化作用
分类号: TQ936.16
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

作为一种安全食品，鸡蛋中含有较高的蛋白质及丰富的脂质，是很好的维生素及矿物质的供给源，同时鸡蛋又兼具易于吸收，价格低廉等特点，因此，它被人们誉为维持生命的营养食品。近些年来，全世界有许多国家在鸡蛋的深加工方面特别是对于鸡蛋中蛋黄的功能成分的提取方面有了突破性的进展。我国的蛋品工业也有了长足的发展，但是与国外的发展状况相比，差距比较大。主要表现在科学研究偏少，科技含量不高，蛋品深加工产品少等(迟玉洁，2001)。为了开拓蛋品资源加工新途径，提高蛋品的高附加值，促进蛋品消费，综合开发鸡蛋黄中的功能因子将是一个很好的研究方向。本实验以卵黄蛋白为原料，对卵黄蛋白多肽的制备、分离纯化及体外抗氧化活性进行了系统研究，主要结论如下：利用酶法制备卵黄蛋白多肽。比较复合风味蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、复合蛋白酶水解卵黄蛋白的效果，确定碱性蛋白酶与复合风味蛋白酶为复合酶解的工艺用酶。采用响应面分析法，以水解度、多肽含量为响应值，研究加酶量、酶用量比、复合酶解时间比、pH值对制备多肽工艺的影响。结果表明：酶法水解卵黄蛋白制备多肽的最佳工艺条件为：卵黄蛋白质量浓度10g/100mL、温度55℃、pH7.2，按0.8g/100mL添加碱性蛋白酶水解2h后，再按0.4g/100mL添加复合风味蛋白酶水解2h，在该条件下水解度和多肽含量分别为13.31%和1.85mg/mL。利用超滤技术对卵黄蛋白酶解液进行初步分离。结果表明：超滤分离卵黄蛋白多肽的最佳条件为：操作压力0.10MPa、温度25℃、pH值7.0、时间20min，在该条件下膜通量为24.37mL/m2·min。通过Sephadex G-25层析柱对超滤得到的卵黄蛋白多肽进行分离纯化，结果表明：用以含有NaCl0.25mol/L的重蒸水进行洗脱，得到4个组分:EYP-1、EYP-2、EYP-3和EYP-4。利用高效液相色谱将初步分离得到的557D的EYP-4纯化，可以得到三个极性不同的组分EYP-4-1、EYP-4-2和EYP-4-3。对所得卵黄蛋白多肽进行体外抗氧化试验，研究温度和pH值对卵黄蛋白肽抗氧化稳定性的影响。结果表明：卵黄蛋白多肽具有很强的清除DPPH自由基、超氧自由基（O2-·）和羟基自由基（·OH）的能力，随着卵黄蛋白肽质量浓度的增加，其清除羟自由基、超氧阴离子自由基及DPPH自由基的能力均随之增加；温度与pH值对蛋清肽的抗氧活性影响较大，在pH12.0条件下存放4h后其抗氧化活性消失。

全文目录

摘要  10-11
Abstract  11-13
第一章绪论  13-25
  1.1 蛋黄蛋白的研究概述  14-16
    1.1.1 蛋黄蛋白简介  14-15
    1.1.2 蛋黄蛋白研究现状  15-16
  1.2 活性多肽的研究概述  16-22
    1.2.1 活性肽的概念与分类  16-17
    1.2.2 活性多肽吸收机制的研究  17-18
    1.2.3 活性多肽的制备方法  18-19
    1.2.4 活性多肽的研究进展  19-22
  1.3 抗氧化肽研究  22-23
    1.3.1 抗氧化肽评价体系概况  22-23
    1.3.2 抗氧化肽研究进展  23
  1.4 本课题研究的目的、意义及主要内容  23-25
    1.4.1 课题研究的目的、意义  23-24
    1.4.2 主要研究内容  24-25
第二章卵黄蛋白多肽的制备  25-36
  2.1 试验材料  25-26
    2.1.1 材料与试剂  25
    2.1.2 仪器与设备  25-26
  2.2 试验方法  26-29
    2.2.1 指标测定  26-27
    2.2.2 卵黄蛋白的提取  27
    2.2.3 制备卵黄蛋白多肽的工艺流程  27
    2.2.4 制备卵黄蛋白多肽的操作要点  27
    2.2.5 蛋白酶的筛选  27
    2.2.6 复合酶解实验  27-28
    2.2.7 复合酶解工艺的单因素实验  28
    2.2.8 响应面中心组合试验设计  28-29
  2.3 结果与分析  29-34
    2.3.1 蛋白酶筛选实验  29-30
    2.3.2 复合酶解实验  30
    2.3.3 复合酶解工艺条件的确定  30-32
    2.3.4 响应曲面法优化试验结果  32-34
    2.3.5 响应曲面法优化试验结果酶解工艺参数的优化及验证  34
  2.4 本章小结  34-36
第三章卵黄蛋白多肽的分离、纯化  36-43
  3.1 试验材料  36-37
    3.1.1 材料与试剂  36
    3.1.2 仪器与设备  36-37
  3.2 试验方法  37-38
    3.2.1 卵黄蛋白肽的超滤  37
    3.2.2 SePhadexG-15 分离纯化卵黄蛋白肽  37-38
    3.2.3 高效液相色谱分离纯化卵黄蛋白肽  38
  3.3 结果与分析  38-42
    3.3.1 超滤分离纯化卵黄蛋白肽结果  38-41
    3.3.2 Sephadex G-15 柱对卵黄蛋白多肽的分离效果  41
    3.3.3 HPLC 对卵黄蛋白多肽的分离纯化效果  41-42
  3.4 本章小结  42-43
第四章卵黄蛋白多肽的体外抗氧化活性研究  43-48
  4.1 试验材料  43-44
    4.1.1 材料与试剂  43
    4.1.2 仪器与设备  43-44
  4.2 试验方法  44-45
    4.2.1 卵黄蛋白肽 DPPH 自由基清除能力测定  44
    4.2.2 卵黄蛋白肽超氧阴离子自由基(O -2·)清除能力测定  44
    4.2.3 卵黄蛋白肽羟自由基（·OH）清除能力测定  44-45
    4.2.4 pH 值对卵黄蛋白肽清除·OH 能力的影响  45
    4.2.5 温度对卵黄蛋白肽清除·OH 能力的影响  45
  4.3 结果与分析  45-47
    4.3.1 卵黄蛋白肽清除自由基能力测定结果  45-46
    4.3.2 卵黄蛋白 pH 值对卵黄蛋白肽抗氧化稳定性影响  46
    4.3.3 温度对卵黄蛋白肽抗氧化稳定性影响  46-47
  4.4 本章小结  47-48
第五章结论与展望  48-50
  5.1 主要结论  48-49
  5.2 展望  49-50
参考文献  50-55
致谢  55-56
攻读学位论文期间发表文章  56-57
论文图表统计  57

卵黄蛋白多肽的制备及其抗氧化活性研究

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