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HPV高低危基因型感染宫颈组织的比较蛋白质组学分析及其差异
作 者: 齐淑贞
导 师: 王千秋;张国成;曹元华;曾学思
学 校: 中国协和医科大学
专 业: 皮肤病与性病学
关键词: 尖锐湿疣(CA) 宫颈上皮细胞内瘤变(CIN) 人乳头瘤病毒(HPV) 测序 液相芯片杂交法(luminex) 蛋白质组学 双向凝胶电泳(2-DE) 质谱分析(MS) 生物信息学
分类号: R752.53
类 型: 博士论文
年 份: 2007年
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内容摘要
目的研究HPV感染宫颈组织后蛋白质组表达情况,初步探讨高、低危基因型感染宫颈组织后表达的差异,并对差异的蛋白点通过质谱分析其意义。方法首先采用测序法及luminex法对42例临床HPV感染的标本进行高、低危基因分型,分成HPV高危基因型感染宫颈组织的CIN组,低危基因型感染宫颈组织的CA组,每组筛选出3例标本,打成混合池,与正常对照3例标本混合池进行双向凝胶电泳,比较之间的差异,选取差异大的蛋白点,进行MALDI-TOF质谱分析。结果1.对HPV感染阳性的31例女性泌尿生殖道尖锐湿疣和11例宫颈CIN组织标本,通过测序法和luminex法分型的结果为:(1)尖锐湿疣标本(无论长在什么部位)或CINⅠ标本,其HPV感染的基因型均为6、11等低危型,测序表现出的是单一峰型,而宫颈CINⅡ~Ⅲ,其HPV感染的基因型均为16、18、33、58等高危型或高危型的混合感染,测序表现出的是单峰或杂峰;(2)外阴和宫颈同时患有尖锐湿疣的标本,其HPV感染的基因型是一致的。2.我们将每组筛选的3例标本打成混合池,并对宫颈尖锐湿疣、宫颈CIN及对照宫颈上皮组织蛋白质组图谱进行两两比较,HPV低危基因型感染的宫颈尖锐湿疣组织标本与正常宫颈组织标本相比有63个蛋白质点有显著差异,其差异倍数最大的为20.2939,宫颈尖锐湿疣组表达上调的蛋白点有51个,下调的有12个蛋白点;HPV高危基因型感染的宫颈CIN组织标本与正常宫颈组织标本相比有47个蛋白质点有显著差异,宫颈CIN表达上调的蛋白点有21个,下调的有26个蛋白点,上调倍数最大的为11.2506倍,下调倍数最大的为9.00021倍。HPV高危基因型感染的宫颈CIN组织标本与低危基因型感染的宫颈尖锐湿疣组织标本相比有39个蛋白质点有显著差异,宫颈CIN组较宫颈湿疣组表达上调的蛋白点有15个,下调的有24个蛋白点,上调倍数最大的为4.24857倍,下调倍数最大的为3.37334倍。3.我们对3组26个差异蛋白质点进行分析,获得了22张肽质量指纹图,软件识别其有效肽片段峰后查询数据库,搜索后得到匹配的有18个蛋白质点,并通过查询NCBInr数据库,获得初步鉴定的18个蛋白质的功能信息。它们主要与细胞代谢、信号传导、细胞分泌、细胞骨架构建及细胞增值、分化与凋亡等相关。结论本实验采用双向凝胶电泳技术得到了HPV高、低危基因型感染宫颈组织和正常宫颈上皮组织的蛋白组表达图谱,并找到两者之间的差异蛋白点。通过质谱分析及生物信息学技术鉴定了部分差异蛋白,其中一些可能与宫颈肿瘤发生发展密切相关。为HPV感染宫颈组织的蛋白质数据库的建立提供了有意义的资料。这些蛋白点能否作为诊断的标记物和治疗的靶标,值得进一步研究。
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全文目录
缩略语 7-9 全文摘要 9-11 Executive Summary 11-13 第一部分 利用测序法和luminex法进行尖锐湿疣中人乳头瘤病毒的基因分型研究 13-32 前言 14-16 材料和方法 16-22 结果 22-29 讨论 29-31 参考文献 31-32 第二部分 HPV感染人体宫颈组织的蛋白质组学分析及其与高低危基因型的关系 32-80 前言 33-36 第一章 样品制备 36-41 材料与方法 36-39 结果 39 讨论 39-41 第二章 双向凝胶电泳 41-61 材料和方法 41-47 结果 47-58 讨论 58-60 实验缺陷及改进 60-61 第三章 质谱分析 61-80 材料和方法 61-64 结果 64-70 讨论 70-76 参考文献 76-80 全文小结 80 展望 80-81 综述 蛋白质组学在HPV研究中的进展 81-88 读研期间发表论文 88-90 致谢 90-91
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中图分类: > 医药、卫生 > 皮肤病学与性病学 > 皮肤病学 > 病毒性皮肤病 > 疣 > 尖锐湿疣
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