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应用单克隆抗体评价捕食性天敌对麦长管蚜的控制作用

作　者: 高书晶
导　师: 庞保平
学　校: 内蒙古农业大学
专　业: 作物栽培学与耕作学
关键词: 麦长管蚜杂交瘤技术单克隆抗体捕食作用评价
分类号: S476.2
类　型: 博士论文
年　份: 2007年
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内容摘要

采用目测法和网捕法对小麦整个生长季节内昆虫群落进行了系统调查,共查得麦田昆虫10目、62科、113种,其中植食类8目、18科、51种,捕食类5目、11科、23种,寄生类2目、12科、24种,腐食和吸血类1目、12科、15种。采用最优分割法分析了麦田昆虫群落的时间格局并提出了相应的防治策略。从营养层和功能团角度对麦田结构和动态进行了研究。应用杂交瘤技术,在国内外首次以捕食麦长管蚜的多异瓢虫的消化道粗提物为免疫原,成功地制备出2株高度特异性的麦长管蚜单克隆抗体,分别命名为:EGA-4A9和EGA-2C4。应用间接ELISA测定抗体效价的结果表明,2株单克隆抗体的效价非常高都达到4.09×106以上。这2株抗体都不与麦田中其它种类的昆虫及捕食者发生交叉反应,而且也不与捕食其它蚜虫的多异瓢虫反应,具有高度的特异性。利用鼠源单克隆抗体亚类鉴定试剂盒(ClonotypingTM System/HRP)以双抗夹心ELISA方法进行检测,结果表明EGA-4A9和EGA-2C4分泌的单克隆抗体均为IgG2a亚类。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western blot印迹分析表明,单克隆抗体EGA-4A9与取食麦长管蚜后的多异瓢虫粗提物中21kDa和23kDa的多肽结合,单克隆抗体EGA-2C4与取食麦长管蚜后的多异瓢虫粗提物中20kDa、22kDa和26kDa的多肽结合。从结果可知,单克隆抗体的结合蛋白是麦长管蚜在瓢虫消化道内降解的中间产物。对3种主要的酶联免疫吸附试验(ELISA)的比较研究表明,间接ELISA的灵敏度高于直接ELISA,分别为0.083μg/ml抗原蛋白和0.33μg/ml抗原蛋白,而双抗夹心ELISA的灵敏度最差,根本无法使用。在不同的温度和捕食量下,猎物在捕食者体内成单峰型的降解曲线。温度对猎物的可测定时间有显著影响,随着温度上升猎物的可测定时间不断缩短,特别是当温度达到30℃时,猎物的降解速率迅速上升,其可测定时间非常短,只有1.17天;而当温度在15℃～20℃之间时,猎物降解缓慢,可测定时间为3.52和3.10天。捕食量对猎物的可测定时间也有显著的影响,随着取食量的增加,猎物的可测定时间也随之延长,在25℃时捕食量为1头到3头时,可测定时间从2.80天延长到4.25天。应用麦长管蚜单克隆抗体检测了内蒙古农业大学农场小麦田的捕食性天敌。结果表明,麦田的瓢虫种类较多,对麦长管蚜有较好的控制作用。其中多异瓢虫和龟纹瓢虫的种群数量多,阳性反应率较高,控制作用最好。捕食性天敌总的阳性反应随麦长管蚜种群密度的增加而增加相关关系显著(p<0.03)。本文应用制备的单克隆抗体结合田间调查评价了麦田的主要捕食性天敌及其捕食作用,为有效的利用天敌控制害虫提供了一定的理论依据。

全文目录

摘要  3-4
Abstract  4-11
1 引言  11-41
  1.1 节肢动物田间捕食作用概述  11-27
    1.1.1 捕食性节肢动物对麦田害虫的控制作用  11-13
    1.1.2 节肢动物田间捕食作用的研究方法  13-27
  1.2 单克隆抗体及其在捕食作用研究中的应用  27-38
    1.2.1 概述  27-30
    1.2.2 单克隆抗体的生产  30-36
    1.2.3 单克隆抗体在捕食作用研究中的应用  36-38
  1.3 本研究的目的、意义和技术路线  38-41
    1.3.1 研究的目的和意义  38-39
    1.3.2 研究内容和拟解决的关键问题  39-40
    1.3.3 研究的技术路线  40-41
2 基本材料与方法  41-47
  2.1 材料  41-43
    2.1.1 实验动物  41
    2.1.2 用于单克隆抗体制备的材料  41-42
    2.1.3 用于ELISA 检测的材料  42
    2.1.4 用于抗体类型及亚类鉴定的材料  42-43
    2.1.5 设备与仪器  43
  2.2 方法  43-46
    2.2.1 抗原的准备  43
    2.2.2 单克隆抗体的制备  43-45
    2.2.3 间接ELISA  45
    2.2.4 单克隆抗体类型及亚类鉴定  45-46
    2.2.5 酶标抗体的制备及定量测定  46
  2.3 实验数据的统计分析  46-47
3 研究一麦田昆虫群落的结构与时序动态  47-63
  3.1 材料与方法  47-48
    3.1.1 调查方法  47-48
    3.1.2 分析方法  48
  3.2 结果与分析  48-61
    3.2.1 麦田昆虫群落的组成及相对多度  48-50
    3.2.2 麦田昆虫群落结构和变动  50-54
    3.2.3 麦田昆虫群落时序动态的最优分割与害虫防治策略  54-56
    3.2.4 麦田昆虫群落营养层及功能团的结构  56-57
    3.2.5 麦田昆虫群落各营养层相对多度的季节动态  57
    3.2.6 麦田昆虫群落各营养层个体数量的季节动态  57-59
    3.2.7 麦田昆虫群落多样性的季节动态  59-61
  3.3 讨论  61-63
4 研究二麦长管蚜单克隆抗体的制备及其特性研究  63-77
  4.1 材料与方法  63-67
    4.1.1 材料  63-64
    4.1.2 方法  64-67
  4.2 结果与分析  67-75
    4.2.1 抗原的准备  67-68
    4.2.2 杂交瘤细胞株的建立  68-69
    4.2.3 单克隆抗体的含量测定  69
    4.2.4 单克隆抗体的效价测定  69-70
    4.2.5 单克隆抗体的特异性检测  70-73
    4.2.6 单克隆抗体结合的目标抗原蛋白检测  73
    4.2.7 猎物的可测定时间检测  73-74
    4.2.8 单克隆抗体的类型及亚类鉴定  74-75
  4.3 讨论  75-77
5 研究三麦长管蚜抗原检测最佳 ELISA 条件的建立  77-85
  5.1 材料与方法  77-79
    5.1.1 酶标抗体的制备及定量测定  77
    5.1.2 ELISA 最佳检测浓度的确定  77-79
    5.1.3 不同ELISA 检测灵敏度的比较  79
  5.2 结果与分析  79-83
    5.2.1 酶标抗体的制备  79
    5.2.2 不同ELISA 检测最适条件的确定  79-82
    5.2.3 ELISA 灵敏度的比较  82-83
  5.3 讨论  83-85
6 研究四捕食量和温度对猎物可测定时间的影响  85-93
  6.1 材料与方法  85-86
    6.1.1 供试虫源  85
    6.1.2 试验设计  85
    6.1.3 样品处理和ELISA 试验  85-86
    6.1.4 数据处理  86
  6.2 结果与分析  86-90
    6.2.1 抗原标准曲线  86-87
    6.2.2 温度对猎物可测定时间的影响  87
    6.2.3 捕食量对猎物可测定时间的影响  87-90
  6.3 讨论  90-93
7 研究五应用单克隆抗体评价捕食性天敌对麦长管蚜的控制作用.  93-100
  7.1 材料与方法  93-94
    7.1.1 田间调查和取样  93
    7.1.2 天敌样品处理  93-94
    7.1.3 麦长管蚜单克隆抗体ELISA 检测  94
    7.1.4 数据处理  94
  7.2 结果与分析  94-98
    7.2.1 麦长管蚜和麦田主要捕食者的种群动态  94-97
    7.2.2 主要捕食性天敌对麦长管蚜的捕食作用  97-98
  7.3 讨论  98-100
8 总讨论  100-102
9 主要结论  102-103
致谢  103-104
参考文献  104-126
作者简介  126

应用单克隆抗体评价捕食性天敌对麦长管蚜的控制作用

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