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拮抗菌对冬枣采后病害的生物防治

作　者: 薛梦林
导　师: 张继澍；张力群
学　校: 西北农林科技大学
专　业: 植物学
关键词: 冬枣(Zizyphus jujuba cv. Dongzao) 采后病害拮抗菌生物防治核糖体DNA
分类号: S436.65
类　型: 博士论文
年　份: 2006年
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内容摘要

本文以冬枣采后保鲜效果为前提,以生物防治冬枣采后病害为宗旨,研究了冬枣采后病害的发生,并对其主要病原物进行了鉴定;随之以引发采后主要病害的病原物为靶标,在枣果上进行了拮抗菌的筛选;拮抗菌分类地位的鉴定;进一步对拮抗菌抑制冬枣采后病害的效果开展了研究,并对其产生的生防潜力进行了拮抗机理的初步探索。结果如下:本研究以不同地区枣果主栽区的冬枣为试材,在2004-2005连续两年对其采前和采后侵染病果进行了多批次分离,依据柯赫氏法则对所分离的病原菌进行了致病性测定。通过对不同致病菌株及其近源属种的核糖体5.8S rDNA及其侧翼ITS1和ITS2区的核苷酸序列分析,结合形态观察的方法,发现引起冬枣采后病害的病原物主要有细交链格孢(Alternaria alternata)、多隔镰孢霉(Fusarium decemcellulare Brick)、扩展青霉(Penicillium expansum)和美澳核果褐腐串珠霉(Monilia fructicola)。冬枣采后病害的生物防治,以主要病原菌细交链格孢为靶标筛选拮抗菌。基于拮抗菌在生境位的适应能力和有效定殖,从枣果面和伤口分离和筛选拮抗菌。通过活体(in vivo)的方法,筛选到4种对A. alternata有较好生防效果的拮抗菌,其中一种为拮抗细菌B501,另3种为拮抗酵母菌XY103,XY201和XY801。拮抗细菌和拮抗酵母菌分别依据核糖体16S rDNA和26S D1/D2及ITS区核苷酸序列的比较,结合表型特征的观察和生理生化特性的测定,B501被鉴定为成团泛菌(Pantoea agglomerans);拮抗酵母菌XY103, XY201和XY801分别被鉴定为梅奇属(Metschnikowia)酵母的3个新种Metschnikowia sinensis sp. nov., Metschnikowia zizyphicola sp. nov.和Metschnikowia shanxiensis sp. nov.由于这4种拮抗菌都是首次从枣果表面分离,特别是酵母菌为3个新种,因此对其生防潜力进行了系统的研究。本研究采用枣果刺伤接种和浸泡接种两种方法,对成团泛菌B501和梅奇酵母新种M. zizyphicola XY201进行了抑病效果试验。结果表明,成团泛菌B501以低的浓度1×107 cfu mL-1可有效控制由细交链格孢引发的冬枣病害,其发病率控制在20%以下,显著地好于浓度为1×105cfu mL-1和对照;梅奇酵母种XY201以浓度1×10~6cfu mL-1或1×107 cfu mL-1使用时,可使该病害的发生率控制在8%以下,与浓度为50μg mL-1的化学杀菌剂扑海因防效相当。同时发现,梅奇酵母种XY201对冬枣采后其它病原物多隔镰孢霉(F. decemcellulare Brick)、扩展青霉(P. expansum)和美澳核果褐腐串珠霉(Mon. fructicola)都有显著的抑制效果。这表明梅奇酵母种XY201是一株有效的广谱性拮抗菌。这两种拮抗菌的生防效力可以通过改良剂氯化钙而得以提高,而且与

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摘要  4-6
ABSTRACT  6-11
第一章文献综述  11-23
  1.1 果蔬采后病害的生物防治  11-18
    1.1.1 果蔬采后病害的发生  11
    1.1.2 果蔬采后病害的防治  11-12
    1.1.3 拮抗菌防治果蔬采后病害的研究进展  12-18
  1.2 分子生物学技术在病原真菌和拮抗菌鉴定中的应用  18-21
    1.2.1 DNA(G+C)mol%值  19
    1.2.2 DNA 分子杂交技术  19
    1.2.3 限制性片段长度多态性(Restriction Fragment Length Polymorphism,RFLP)分析  19
    1.2.4 随机扩增多态性DNA(Random amplified polymorphic DNA, RAPD)分析  19-20
    1.2.5 核糖体(rRNA)序列分析  20-21
  1.3 本研究的目的与意义  21-23
第二章冬枣采后病害部分病原菌的鉴定  23-29
  2.1 引言  23
  2.2 材料与方法  23-25
    2.2.1 样品采集  23
    2.2.2 病原物分离与纯化  23
    2.2.3 病原物的致病性测定  23
    2.2.4 病原物鉴定  23-25
  2.3 结果  25-27
    2.3.1 病原菌的分离率及致病性测定结果  25
    2.3.2 病原菌的形态特征  25-26
    2.3.3 病原菌的分子鉴定  26-27
  2.4 讨论  27-29
第三章拮抗菌的分离与筛选  29-34
  3.1 引言  29
  3.2 材料与方法  29-30
    3.2.1 病原菌  29
    3.2.2 果实  29
    3.2.3 筛选方法  29-30
  3.3 结果  30-32
  3.4 讨论  32-34
第四章拮抗菌的鉴定  34-46
  4.1 拮抗细菌B501 的鉴定  34-37
    4.1.1 引言  34
    4.1.2 材料与方法  34-35
    4.1.3 结果  35-37
    4.1.4 讨论  37
  4.2 拮抗酵母菌梅奇属三个新种XY103, XY201 和XY801 的鉴定  37-46
    4.2.1 引言  37-38
    4.2.2 材料与方法  38
    4.2.3 结果  38-45
    4.2.4 讨论  45-46
第五章拮抗菌对病原物的抑制效果  46-56
  5.1 引言  46
  5.2 成团泛菌B501 对冬枣采后细交链格孢(A. alternata)的抑制  46-49
    5.2.1 材料与方法  46-47
    5.2.2 结果  47-49
  5.3 梅奇酵母菌Metschnikowia zizyphicola XY201 对冬枣采后病原物的抑制  49-55
    5.3.1 材料与方法  49-50
    5.3.2 结果  50-55
  5.4 讨论  55-56
第六章拮抗菌生防机理的初步研究  56-64
  6.1 拮抗菌在冬枣上的定殖能力  56-60
    6.1.1 引言  56
    6.1.2 材料与方法  56-57
    6.1.3 结果  57-59
    6.1.4 讨论  59-60
  6.2 拮抗菌的活细胞和培养滤液对采后冬枣病害的抑制  60-62
    6.2.1 引言  60
    6.2.2 材料与方法  60-61
    6.2.3 结果  61-62
    6.2.4 讨论  62
  6.3 成团泛菌B501 的群体感应系统  62-64
    6.3.1 引言  62
    6.3.2 材料与方法  62-63
    6.3.3 结果  63
    6.3.4 讨论  63-64
结论和主要创新点  64-66
参考文献  66-75
附录(图版)  75-78
缩略词  78-79
致谢  79-80
作者简介  80

拮抗菌对冬枣采后病害的生物防治

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