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白术根腐病致病菌的分离及拮抗菌的筛选

作　者: 郑朝成
导　师: 王伟武
学　校: 南京农业大学
专　业: 微生物学
关键词: 白术根腐病 尖孢镰刀菌 拮抗菌 沙雷氏菌
分类号: S435.672
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要


根腐病又称干腐病,是白术种植中的重要病害之一。其发病症状为根茎变褐色至腐烂,地上部分开始萎蔫,根茎切面可见维管束变为褐色。后期根茎全部变为海绵状黑色干腐,植株枯死,极易从土壤中连根拔起。对广大药农而言,根腐病已严重影响了白术的产量和品质。本实验主要通过组织分离法及稀释平板法,从发病植株的根部和正常植株的根际土壤分别分离到一株疑似致病真菌及四株疑似致病真菌的拮抗细菌。通过经典形态学方法和对该真菌核糖体RNA的ITS区域(18S rDNA-5.8S-28S rDNA)的扩增、测序、ITS序列的同源性分析比较和系统发育树的构建,将其归类于镰刀菌属(Fusarium),并将其命名为Fusarium sp. FO14。根据Koch法则对其致病性的鉴定工作正在进行中。从正常植株根际土壤稀释悬液中分离到的拮抗细菌,通过平板对峙法,选择对尖孢镰刀菌抑制效果较好的一株菌进行鉴定,并对该菌对一些其它致病性真菌的抑制效果进行了初步研究。通过生理生化特性鉴定,16s rDNA序列的测定、序列分析及构建系统发育树,将其归类于芽孢杆菌属,并命名为Bacillus sp. BS14。在运用组织分离法分离白术根腐病病原菌的过程中,我们还分离到一株产红色色素的细菌,根据其生理生化特性,参照《伯杰氏细菌鉴定手册》和《常见细菌鉴定手册》,并结合16s rDNA序列的比对分析,将其归类于沙雷氏菌属,并将其命名为Serratia sp. FS14。该菌在pH 4-10的条件下均能生长,并能够耐受10%的NaCl.此外,Serratia sp. FS14还能分泌耐高温的DNA酶和蛋白水解酶,而该细菌的最高生长温度仅为42℃。这种能分泌具有耐高温特性的胞外酶的现象在沙雷氏菌属中还未见报道。

全文目录


摘要  7-8ABSTRACT  8-10缩略词  10-11前言  11-12文献综述  12-26  一、白术根腐病的研究  12-18    1. 白术的药用价值  12    2. 白术根腐病及其危害  12-13    3. 根腐病的病原菌及其致病机制  13-14    4. 尖孢镰刀菌的生物防治  14-18  二、沙雷氏菌属研究进展  18-21    2.1 沙雷氏菌属简介  18    2.2 沙雷氏菌的胞外酶及其应用  18-21  参考文献  21-26第一部分 白术根腐病致病菌、拮抗菌的分离与鉴定  26-46  1 材料和方法  27-31    1.1 供试材料的来源与保存  27    1.2 培养基  27    1.3 微生物的分离、纯化  27    1.4 微生物的形态学观察和生理生化特性的分析  27-28    1.5 微生物的拮抗实验  28    1.6 微生物在分子水平上的鉴定  28-31    1.7 真菌的致病性测定  31  2 结果与分析  31-41    2.1 供试材料的来源  31-32    2.2 微生物的分离  32    2.3 微生物的形态学观察和生理生化分析  32-33    2.4 微生物的拮抗实验  33-37    2.5 拮抗菌的生理生化特性分析  37    2.6 微生物在分子生物学水平的鉴定  37-40    2.7 ITS序列和16S rDNA序列的分析和系统发育树的构建  40-41    2.8 真菌的致病性测定  41  3 讨论  41-43  参考文献  43-46第二部分 沙雷氏菌属菌株FS14(Serratia sp.FS14)的分离鉴定及其分泌的胞外DNA酶和蛋白水解酶的初步研究  46-68  1 材料和方法  47-51    1.1 供试材料及其来源  47    1.2 沙雷氏菌的分离、纯化和保存  47    1.3 在LB培养基中沙雷氏菌的生长曲线的测定  47    1.4 细菌的形态学特征研究  47    1.5 最适生长温度的测定  47    1.6 pH耐受范围和最适pH测定  47    1.7 耐盐性测定  47-48    1.8 细菌的生理生化特性研究  48    1.9 抗生素药敏性测定  48    1.10 细菌的16s rDNA序列的扩增及测定  48    1.11 粗酶液的制备  48-49    1.12 酶液中温度对DNA酶活的影响  49    1.13 粗酶液中温度对蛋白水解酶酶活的影响  49-51  2 结果与分析  51-63    2.1 细菌的生长曲线测定  51    2.2 细菌的形态学研究  51-53    2.3 最适生长温度的测定  53-54    2.4 pH耐受范围和最适pH测定  54    2.5 耐盐性测定  54-55    2.6 细菌的生化性状分析  55-56    2.7 抗生素药敏性测定  56-57    2.8 细菌16s rDNA的扩增及分析  57-59    2.9 粗酶液的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳  59-60    2.10 粗酶液中温度对DNA酶活的影响  60-61    2.11 温度对粗酶液中蛋白水解酶酶活的影响  61-63  3 讨论  63-65  参考文献  65-68全文总结  68-70研究的主要创新点  70-72附录1 文中所用培养基及试剂配方  72-80附录2 有关核苷酸序列  80-84致谢  84

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中图分类: > 农业科学 > 植物保护 > 病虫害及其防治 > 农作物病虫害及其防治 > 经济作物病虫害 > 药用作物病虫害 > 草本作物病虫害
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