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负载EBV-LMP2基因人树突状细胞疫苗的制备及抗肿瘤免疫研究

作　者: 盘鹰
导　师: 张锦堃
学　校: 汕头大学
专　业: 病理学与病理生理学
关键词: 树突状细胞腺病毒载体 LMP2基因细胞毒性T细胞肿瘤疫苗钙离子载体
分类号: R73-36
类　型: 博士论文
年　份: 2006年
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内容摘要

目的 1．采用细胞因子组合GM-SCF、IL-4和TNF-α体外诱导人外周血单核细胞分化增殖为树突状细胞(dendritic cell，DC)，并以腺病毒为载体，将鼻咽癌(NPC)相关的Epstein-Barr病毒潜伏膜蛋白2(EBV-LMP2)转染DC，制备rAd-LMP2-DC疫苗。检测其生物学特性；体外诱导并测定细胞毒T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte，CTL)活性；进而观察其对NPE荷瘤小鼠的免疫治疗作用，以及在hu-PBL-SCID小鼠体内对肿瘤的免疫防治效应。2．探索无血清条件下应用钙离子载体(CI)诱导成熟DC的方法。检测其生物学特性；体外诱导并测定CTL活性。方法 1．rAd-LMP2-DC疫苗的制备：采用细胞因子rhGM-CSF、rhIL-4和rhTNF-α组合诱导人外周血单核细胞向DC分化，在重组腺病毒介导下将EBV-LMP2基因转染DC，制备rAd-LMP2-DC疫苗。动态观察细胞形态学变化，扫描电镜观察成熟DC的形态学特征；FACS检测DC表型CD80、CD86、CD83及LMP2阳性表达率。2．体外抗肿瘤实验：采用混合淋巴细胞反应，用rAd-LMP2-DC刺激T细胞诱导生成LMP2特异性CTL，并用MTT法检测CTL对NPC肿瘤细胞CNE-2的杀伤活性，观察DC刺激次数对CTL杀伤活性的影响，以及FACS检测CTL中CD3~+、CD4~+、CD8~+的组成。3．体内抗肿瘤实验：选用SCID小鼠为实验动物。(1)建立SCID小鼠-人淋巴细胞嵌合模型：人外周血T

全文目录

缩略词表  5-8
中文摘要  8-12
英文摘要  12-17
前言  17-22
第一部分 EBV-LMP2重组腺病毒转染树突状细胞疫苗的制备  22-40
  材料与方法  22-30
  结果  30-36
  讨论  36-40
第二部分 EBV-LMP2重组腺病毒转染树突状细胞疫苗抗肿瘤活性的研究  40-74
  材料与方法  40-48
  结果  48-68
  讨论  68-74
第三部分外周血PBMC来源的树突状细胞快速无血清培养方法的探讨  74-89
  材料与方法  74-78
  结果  78-86
  讨论  86-89
结论  89-90
参考文献  90-99
综述  99-108
附录  108-109
致谢  109

负载EBV-LMP2基因人树突状细胞疫苗的制备及抗肿瘤免疫研究

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