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花生变应原研究
作 者: 李宏
导 师: 张宏誉
学 校: 中国协和医科大学
专 业: 内科免疫
关键词: 花生仁 食物 过敏原 协和 过敏性 变态反应 学位 抗原 蛋白质 聚丙烯酰胺
分类号: R593.2
类 型: 博士论文
年 份: 2000年
下 载: 159次
引 用: 3次
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内容摘要
花生是重要的学位论文">食物变应原。花生过敏反应因其潜在的危险性、长期慢性反应以及不断增加的发病率而日益受到重视。花生过敏反应可发生在各个年龄段,轻可出现口腔粘膜过敏、皮肤荨麻疹等,重可出现危及生命的严重咽喉水肿、急性哮喘、过敏性休克,甚至导致死亡。目前研究已初步证明花生是由多组份变应原组成,对其中少数主要变应原的理化特性及免疫学特征也有一定的认识。但距完全了解花生变应原中各个致敏组份还相差很多。 本研究利用PBS溶液,提取去脂花生,经膜包分子筛和冷冻干燥等技术,得到花生变应原。从门诊病人中收集典型的花生过敏病人20例。花生过敏诊断主要结合典型的食物过敏病史,皮肤点刺试验阳性以及RAST FEIA测出的特异性IgE重度升高,个别病例辅以食物激发试验加以确诊。利用其中8例花生高度过敏病人血清组成的血清池,采用带有质控保证的Pharmacia CAP System进行了花生变应原的RAST inhibition试验,结果显示生花生和熟花生(以烤花生为例)抗原二者产生的RAST inhibition线的斜率分别为0.53和0.51,t检验P>0.05,两者达到50% inhibition所需的抗原量分别为33.9μg和30.2μg,熟花生抗原强度稍高于生花生,加热也许有利于增强花生抗原与IgE的结合。但总体而言,生花生和烤花生二者的抗原性效价无显著差异,是基本接近一致的。 同时还对花生变应原进行了聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫印迹(Immuno-blot)分析。实验结果:SDS-PAGE表明,花生变应原至少含有14条蛋白区带,其中以63kd、41.7kd、39kd、34.8kd、和17.9kd等5条带蛋白含量最丰富。免疫印迹显示:花生变应原中有
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全文目录
论文部分 5-71 前言 5-7 中文摘要 7-9 英文摘要 9-12 第一部分 花生变应原抗原性及致敏组份分析 12-32 临床资料收集 13-15 抗原制备 15-17 RAST抑制试验 17-22 聚丙烯酰胺凝胶电泳及免疫印迹 22-32 第二部分 花生变应原Ara h1的基因克隆与原核表达 32-57 实验原理 33-34 实验材料 34-40 实验方法 40-51 花生总RNA的提取 40 RT-PCR 40-41 PCR扩增Ara h1目的基因片段 41-43 PCR回收产物Ara h1与pGEM-T easy Vector的连接 43-46 Ara h1基因导入pGEM-11Z载体 46-47 Ara h1基因转入原核表达载体pRSET-B 47-48 Ara h1蛋白的诱导表达与纯化 48-50 聚丙烯酰胺凝胶电泳及免疫印迹检测 50-51 实验结果 51-57 讨论 57-62 小结 62-63 参考文献 63-67 英文缩写词 67-69 附图表 69-71 综述部分 71-93 综述 71-86 参考文献 86-93 致谢 93
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中图分类: > 医药、卫生 > 内科学 > 全身性疾病 > 免疫性疾病 > 自身免疫性疾病、结缔组织疾病
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