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新型微管结合蛋白NuSAP的有丝分裂期调控功能及DNA结合能力研究

作　者: 李璐
导　师: 贺福初
学　校: 中国人民解放军军事医学科学院
专　业: 细胞生物学
关键词: NuSAP 有丝分裂期阻滞 p53 ATM 微管结合活性
分类号: Q25
类　型: 博士论文
年　份: 2005年
下　载: 127次
引　用: 1次
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内容摘要


有丝分裂期(mitosis phase)调控是细胞生物学领域的中心问题之一,纺锤体组装和染色体分离是其中心事件,它的正常进行依赖于微管的正确调控,但至今仍有大量谜题需要回答。NuSAP(nucleolar spindle-associated protein)是2003年新发现的一种新型微管结合蛋白,在间期细胞内定位于核仁,在分裂期细胞内与纺锤体共定位。它的表达在G2/M期到达峰值,有丝分裂后逐渐消失。提示它的表达定位都呈强烈的周期性。作为一种微管结合蛋白,它参与纺锤体的组装,它的低表达对纺锤体的正常组装产生严重的影响。这表明NuSAP是一种重要的微管调控分子,因而可能参与有丝分裂期调控。但是,NuSAP的研究仍有许多问题需要回答。例如NuSAP在哪些正常人组织/细胞中发挥作用?在无NuSAP内源性表达的细胞中,外源的NuSAP的表达会造成怎样的影响?NuSAP是否及如何参与有丝分裂期调控? 首先我们对NuSAP进行了基本的生物信息学分析和表达谱研究。不同物种间序列比对揭示NuSAP具有四个保守区域,对应于SAP结构域、核定位信号(nuclear localization signal,NLS)和微管结合功能域,提示这些保守区对于NuSAP的功能非常重要。组织表达谱分析表明NuSAP高表达于胎肝、胸腺、骨髓及多种血液来源的肿瘤细胞系中。而在高度分化的免疫器官/组织—淋巴结、脾脏和外周血中NuSAP丰度很低甚至没能检测到表达,提示NuSAP可能在造血/免疫组织中发挥作用。 其次,我们的研究表明NuSAP的表达将多种肿瘤细胞持续地阻滞在M期,至少从转染后16-72小时没有检测到检查点逃逸现象。提示NuSAP诱导的细胞周期阻滞并非短暂的过程,很可能是一种不可逆的阻滞。通过构建截短体,揭示该蛋白微管结合结构域对于周期阻滞功能是必需的,提示NuSAP结合微管的活性是诱导细胞M期阻滞的基础。 由于p53是M期检查点的重要调控分子,负责阻止细胞从有丝分裂检查点逃逸,防止多倍体产生。于是我们分析了p53在NuSAP诱导的有丝分裂期阻滞中的角色。研究发现NuSAP导致p53野生型、突变型和敲除细胞均发生周期阻滞,而且NuSAP的表达对p53野生株HCT-116的内源性p53蛋白水平没有明显

全文目录


摘要  4-6
Abstract  6-8
常用缩略名  8-9
前言  9-13
主要仪器和试剂  13-16
第一章 NuSAP的序列特征与组织表达谱分析  16-31
  1 材料与方法  17-22
  2 结果  22-28
  3 讨论  28-29
  4 小结  29-31
第二章 NuSAP能导致多种细胞停滞在有丝分裂期  31-41
  1 材料与方法  32-34
  2 结果  34-39
  3 讨论  39-40
  4 小结  40-41
第三章 NuSAP诱导有丝分裂期阻滞机制的初步探讨  41-52
  1 材料与方法  42-45
  2 结果  45-49
  3 讨论  49-50
  4 小结  50-52
第四章 NuSAP的SAP结构域功能探讨  52-60
  1 材料与方法  54-56
  2 结果  56-59
  3 讨论  59
  4 小结  59-60
总结和讨论  60-63
参考文献  63-69
附录1 综述：N端SAP蛋白与凋亡  69-75
附录2 综述：RNA干扰技术的发展和应用  75-81
附录3 在读期间投稿或发表的文章  81-82
致谢  82

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中图分类: > 生物科学 > 细胞生物学 > 细胞生理学
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