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颈7不同方式切断对神经元影响及利多卡因对其保护的实验研究

作　者: 糜菁熠
导　师: 徐建光
学　校: 复旦大学
专　业: 手外科
关键词: 神经元逆行退变神经保护因子利多卡因荧光染料免疫荧光
分类号: R651.3
类　型: 博士论文
年　份: 2004年
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内容摘要

目的:为了进一步提高颈7神经根移位术修复臂丛神经损伤的疗效,最大限度减少颈7神经根切断对于脊髓前角运动神经元的影响,保护及促进移位术后神经的再生作用,本课题全面研究颈7神经根不同方式切断及切断后不同时间缝合对神经元逆行性退变的不同作用,并进一步探讨神经阻滞剂诸如利多卡因等对于神经元保护及防止逆行性退变发生的作用,为临床提高颈7神经根移位术的疗效提供实验理论依据。方法:本课题两大部分五个系列实验均采用统一的大鼠颈7神经根切断模型和True Blue逆行示踪标记技术,对于颈7节段背根神经节感觉神经元和脊髓前角运动神经元进行标记并精确计数;应用True Blue逆行标记结合NSE免疫荧光双标法验证逆行标记神经元的活性,从而对神经元数量变化和活性进行客观评价。(一)第一部分:探讨不同方式切断颈7以及颈7切断后不同时间缝合对与神经元的影响:1、探讨颈7神经根不同方式选择性切断是否会造成神经元逆行性退变,以及有何规律。设计正常对照组、颈7全干切断、前股切断、后股切断四组,采用True Blue注射法逆行标记,对各组神经元数量变化进行统计学比较。2、研究颈7神经根全干切断后不同时间再缝合对神经元逆行性退变的影响。仍采用True Blue注射法逆行标记神经元,在颈7切断后立即缝合或4周、8周、12周后缝合神经,观察各组神经元数量变化规律。(二)第二部分:利多卡因的神经阻滞作用对神经元保护保护的影响1、研究利多卡因神经根外膜下注射对神经元的保护作用。采用True Blue浸泡法逆行标记神经元,比较利多卡因组和对照组神经元数量的改变。2、研究利多卡因神经根外膜下注射对神经元保护的时间效应关系。True Blue浸泡法逆行标记神经元,比较利多卡因神经外膜下注射后0分和10分钟切断神经对神经元的影响。3、比较利多卡因、普鲁卡因和布比卡因对神经元的保护作用。仍用True Blue<WP=6>浸泡法逆行标记神经元,比较利多卡因、普鲁卡因和布比卡因神经根外膜下注射后对神经元的影响。结果:True Blue逆行标记神经元后,即使在术后16周也不会发生明显的扩散和衰减,并可以保证足够清晰的荧光;在各组术后1周和16周,True Blue标记的感觉和运动神经元几乎都可以同时被NSE免疫荧光双标。1、实验一探讨颈7神经根不同方式选择性切断是否会造成神经元逆行性退变及有其规律。结果:① 背根神经节感觉神经元计数结果:全干切断颈7神经根导致术后4周～16周神经元数量显著减少(P<0.05);颈7前股切断组仅4周时显著减少14.8%(P<0.05),但之后不再减少;颈7后股切断组不发生神经元数量变化。② 脊髓前角运动神经元计数结果:全干切断组神经元数量8周～16周持续减少(P<0.05);前股切断组运动神经元数量始终不发生变化;后股切断组在8周时神经元数量显著减少后(P<0.05)不再发生变化。2、实验二研究颈7神经根全干切断后不同时间再缝合对神经元逆行性退变的影响。结果:① 背根神经节感觉神经元计数结果:立即缝合组在术后不发生显著的神经元数量变化(P>0.05)。4周缝合组在术后16周才发生感觉神经元数量显著减少(P>0.05)。8周缝合组和12周缝合组取材的3个时间组神经元计数结果都比4周缝合组以及立即缝合组相应时间点结果明显减少(P<0.05)。② 脊髓前角运动神经元计数结果:立即缝合组和4周缝合组运动神经元数量不随时间推移而变化,8周缝合组运动神经元数量与立即缝合组和4周缝合组相应时间点比较,均显著减少(P<0.05),而12周缝合组结果比8周组也显著减少(P<0.05)。3、实验三研究利多卡因神经根外膜下注射对神经元的保护作用。结果:① 背根神经节感觉神经元计数结果:1周时各组神经元数量无差异(P>0.05);对照组神经元数量在4周～16周持续显著减少(P<0.05);利多卡因组推迟至8周后才发生神经元数量明显减少(P<0.05),但同时间点时利多卡因组的神经元数量明显多于对照组(P<0.05)。② 脊髓前角运动神经元计数结果:4周内各组都不会发生明显运动神经元数量变化(P>0.05),而8周后,利多卡因组和对照组神经元数量均明显减少(P<0.05),但利多卡因组从8周起运动神经元数量显著多于对照组(P<0.05)。4、实验四研究利多卡因神经根外膜下注射对神经元保护的时间效应关系。结果:① 背根神经节感觉神经元计数结果:对照组4周～16周时神经元数量持续减少(P<0.05);利多卡因0分组和10分组之间在各时间点均无统计学差异(P>0.05),8周～16周两组感觉神经元数量也有明显减少(P<0.05),但在各<WP=7>时间点均明显多于对照组(P<0.05)。② 脊髓前角运动神经元计数结果:4周内各组运动神经元数量都不会发生明显变化;8周后,各组运动神经元数量明显减少(P<0.05),但利多卡因0分组和10分组从8周起运动神经元数量显著多于对照组(P<0.05),而利多卡因两组间神经元数量在各个时间点均无差异(P>0.05)。5、实验五比较利多卡因、普鲁卡因和布比卡因对神经元的保护作用。结果:① 背根神经节感觉神经元计数结果:对照组4周～16周时神经元数量持续减少(P<0.05);利多卡因和布比卡因不仅可以减少神经元死亡数量而且可以使神经元数量减少迟至8周才发生;普鲁卡因仅能一定程度上减少神经元死亡数量,但4周时神经元仍会显著减少(P<0.05)。② 脊髓前角运动神经元计?

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