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调控成骨细胞分化的信号转导通路研究

作　者: 陈小三
导　师: 毛宁；于晓妉
学　校: 中国人民解放军军事医学科学院
专　业: 细胞生物学
关键词: 成骨细胞分化信号通路 MAPK PI3K
分类号: R329.2
类　型: 博士论文
年　份: 2004年
下　载: 483次
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内容摘要

成骨细胞在分化过程中受到多种来自胞外的信号及其相关通路的调控。本研究应用来源于胎鼠颅骨的成骨前体细胞系MC3T3-E1探讨MAPK在成骨细胞分化过程中的调控作用。首先，应用50μg／ml抗坏血酸和10 mM β-磷酸甘油联合作用的化学诱导剂在体外建立稳定和可重复的成骨细胞分化诱导和鉴定体系。然后，应用Western-blot实验检测MAPK信号通路相关蛋白在成骨细胞分化中的活化情况。在具体研究MAPK信号通路对成骨细胞分化调控的实验中，主要采取阻断和增强活化的两种研究方法。一方面，应用相关信号通路的特异性抑制剂阻断这些信号通路的作用，观察成骨细胞分化的变化。另一方面，应用脂质体转染体系将MEK1野生型和MEK1活化型基因导入成骨细胞中，通过筛选出稳定转染的细胞系，然后应用这些细胞系研究相关信号通路对成骨细胞分化的调控作用。最后，应用成骨分化相关细胞因子BMP-2刺激稳定转染MEK1野生型和MEK1活化型基因的MC3T3-E1细胞，研究BMP-2的成骨诱导作用通路与MAPK通路相互关系。同时，还初步观察了PI3K信号通路对成骨细胞分化的调控作用。实验结果表明：(1) 体外建立了稳定、可靠和可重复的成骨细胞分化诱导体系，即联合应用50μg／ml抗坏血酸和10 mM β-磷酸甘油连续诱导成骨细胞两周以上，成骨细胞分化的检测主要通过ALP和von Kossa染色进行。(2) MAPK信号通路中p38旁路是成骨细胞分化所必须的，而MEK／ERK旁路在成骨细胞分化过程中发挥抑制效应；(3) PI3K是成骨细胞分化所必须的，具体调控机制仍有待进一步研究。(4) BMP-2对成骨细胞分化的诱导作用并不直接通过活化MAPK信号通路来实现。

全文目录

英文缩略词  4-5
中文摘要  5-6
ABSTRACT  6-7
前言  7-10
第Ⅰ部分成骨细胞体外分化诱导和鉴定体系的确立  10-21
  实验流程  11
  实验材料和方法  11-15
  结果  15-18
  小结  18-19
  讨论  19-21
第Ⅱ部分 MAPK 信号通路对成骨细胞分化的调控作用研究  21-43
  一、阻断MAPK信号通路的活化对成骨细胞分化的影响  21-35
    实验材料和方法  22-30
    结果  30-35
  二、转染MEK1野生型/活化型基因对成骨细胞分化的影响  35-43
    实验材料和方法  35-36
    结果  36-39
    小结  39-40
    讨论  40-43
第Ⅲ部分 PI3K信号通路对成骨细胞分化的调控作用的观察  43-47
  实验流程  43
  实验材料和方法  43-44
  结果  44-46
  讨论  46-47
总结  47-48
参考文献  48-52
致谢  52-53
博士期间待发表论文集  53-71

调控成骨细胞分化的信号转导通路研究

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