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组蛋白去乙酰化酶4在成骨细胞分化中作用的初步探究

作　者: 姜晴
导　师: 刘文广
学　校: 东北师范大学
专　业: 遗传学
关键词: 成骨细胞分化 Runx2 Osterix HDAC4 PTH
分类号: R329
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

近年来,对于骨质疏松等代谢性骨疾病的研究越来越深入。人们主要从抑制骨吸收和促进骨生成两方面进行研究。从骨生成的角度考虑,许多人都在分析研究决定骨发育的转录因子,比如Runx2和Osterix以及与它们密切相关的辅助因子之间的关系。组蛋白去乙酰化酶(HDACs)通过调节转录因子的活性等影响成骨发育。其中,HDAC4是HDACⅡ家族a亚类的成员,是一种核质穿梭蛋白。甲状旁腺激素(PTH)是一种在骨生成和骨吸收之间调节骨量的激素。本研究主要采用Western blot,免疫荧光,RT-PCR和碱性磷酸酶活性检测等实验技术和方法。本研究证明了在正常培养条件下的间充质干细胞C3H10T1/2中,PTH以一种较低剂量时可以使HDAC4发生核质穿梭,从原来大量定位于细胞质中,穿梭入核,从而与Runx2和Osterix发生可能的相互作用。本文除了发现了PTH能够使HDAC4发生入核现象外,还初步进行了HDAC4对Runx2和Osterix功能活性的影响的研究,通过检测成骨细胞特异表达基因的mRNA水平和碱性磷酸酶活性,发现了HDAC4可能间接地对Osterix诱导的成骨细胞分化有一定的抑制作用。本文的结果为研究骨发育,治疗骨质疏松等疾病的作用机制方面提供了更加深入的理论依据。

全文目录

中文摘要  4-5
英文摘要  5-8
引言  8-15
  一、研究背景  8-13
    （一）骨的形成  8-9
    （二）控制骨发育的转录因子  9-11
    （三）组蛋白去乙酰化酶 HDACs  11-13
    （四）甲状旁腺激素 PTH  13
  二、研究内容  13-14
  三、研究意义  14-15
材料与方法  15-22
  一、实验材料  15-18
    1. 细胞  15
    2. 药品及试剂  15-16
    3. 引物  16-17
    4. 质粒  17
    5. 抗体  17
    6. 实验器材和仪器  17-18
  二、实验方法  18-22
    1. 细胞培养  18
    2. 质粒构建  18
    3. 转染  18-19
    4. Western blot  19
    5. 免疫荧光  19-20
    6.A LP 染色  20
    7.R T-PCR  20-22
结果与分析  22-26
  一、HDAC4-pmxs-puro 质粒构建  22-23
  二、内源 HDAC4 检测及过表达体系的建立  23
  三、过表达 HDAC4 对成骨细胞分化的影响  23-24
  四、PTH 可以诱导 HDAC4 入核  24-26
讨论  26-28
结论  28-29
参考文献  29-32
致谢  32

组蛋白去乙酰化酶4在成骨细胞分化中作用的初步探究

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