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华东地区家鸭中不同HA亚型禽流感病毒的分布以及从家养水禽和鸡中分离的H5亚型禽流感病毒HA基因的分子流行病学

作　者: 钱忠明
导　师: 刘秀梵
学　校: 扬州大学
专　业: 预防兽医学
关键词: A型流感病毒分布 H5亚型禽流感病毒致病性传播性 HA NA 遗传发生分析
分类号: S852.65
类　型: 博士论文
年　份: 2004年
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内容摘要

禽流感是由A型流感病毒引起的一种禽类的感染和／或疾病的综合征。高致病性禽流感(HPAI)是由一些H5和H7亚型禽流感病毒(AIV)引起禽类的一种以高发病率和高死亡率为特征的烈性传染病。A型流感病毒的自然宿主是野生水禽、鸥和岸基鸟，而家鸭也是AIVs巨大的储存库，同时也被认为是AIVs从自然宿主到陆生家禽传播的一个重要中间宿主。最近几年来，我国鸡群中流行的H5亚型高致病性AIVs很可能是直接来源于家养水禽。本文调查了2002—2003年华东地区家鸭中AIVs的分布，对有代表性的鸡、鸭、鹅源的H5亚型AIVs的致病性、传播性和HA、NA基因进行比较。此外还对2000—2003年从不同家禽中分离的26株H5亚型AIVs的HA基因序列进行遗传发生关系的分析。一、华东地区家鸭中不同HA亚型禽流感病毒的分布为了确定我国家鸭中禽流感病毒的流行和分布状况，对华东地区的家鸭进行了病毒学监测。2002年7—8月，在华东五省一市的健康家鸭中采集到673个鸭泄殖腔拭子。从2002年12月到2003年11月，在江苏省扬州市家禽市场采集鸭泄殖腔拭子，每月一次，共采集到930个鸭泄殖腔拭子。对这1603个泄殖腔拭子用鸡胚尿囊腔传代接种法分离病毒。对有血凝活性的样品用HI试验和AGP试验进行A型流感病毒的鉴定。用H1—H15的HA亚型特异性血清对A型流感病毒做HI试验，进行HA亚型的鉴定。部分分离株用HA亚型特异性引物的RT—PCR法进行HA亚型的鉴定。从1603个鸭泄殖腔拭子中共分离到207株禽流感病毒，总分离率为12.9％。经HI试验和RT—PCR法鉴定，这207株禽流感病毒中共有8种HA亚型，扬州大学博士论文包括HI、H3、H4、HS、H6、Hg、H10和Hll亚型。在这些禽流感病毒中，优势禽流感病毒是HS亚型禽流感病毒，共81株，占总数的39.1%(81/207)。其次是H3亚型病毒，共63株，占总数的30.4%(63/2 07)。很少分离到Hg亚型病毒，仅有2株。不同月份的分离率显示，2003年1、2、3月(冬春季节)的分离率特别高，分别为56.4%、40.0%和40.5%。其次是在2002年12月份、2003年4、10和11月份，它们的分离率在8一14.7%，而2002年7、8月和2003年7、8、9月(夏季)的分离率则很低，低于6.0%。HS亚型病毒的分离率也具有相似的特征，2003年l、2、3月的分离率分别为42石%、16.2%和30.4%，而其它月份分离率相当低，有时几乎分离不到病毒。H3亚型病毒几乎每个季节都能分离到，但以春秋季节的分离率较高。通过比较发现，我国家鸭中禽流感病毒分布的季节性与国外野生水禽中禽流感病毒分布的季节性相反。本次调查的结果表明，我国家鸭在冬春季节时HS亚型病毒的高感染率，可能与我国近几年来鸡在冬春季节易发HS亚型高致病性禽流感有一定的联系。二、鸡源、鸭源和鹅源HS亚型禽流感病毒的特性我国家鸭中HS亚型禽流感病毒的分离率在冬春季节时相当高，而此时正是鸡HSNI亚型HPAI的高发期。为了证实我国鸡群中的HS亚型病毒可能直接来源于家养的水禽，我们对6株不同来源的HS亚型病毒进行比较。这6株病毒几乎在同一时期和地理位置上分离的，其中2株为健康鸭源病毒，2株为健康鹅源病毒，还有2株为鸡源病毒。对鸡的致病性试验结果显示，这些HS亚型病毒对鸡都是高致病性的，在24小时内致死所有鸡只。用针对这6株病毒的特异性血清进行抗原性分析发现，除了D灯Yzl30/03与其它5株有一定差异，特别对Gs/Yz6O/03的差异较显著外，其它5株病毒在抗原性上几乎相同，不能用常规的血清学方法区分。HAI和NA基因的遗传发生分析显示，这些病毒的HAI基因与Gs/G山%HSNI病毒有较高的同源性(95.6一%.1%)，在同一个进化分支中，并演变成一个独立的亚分支。6株病毒的HAI基因高度同源，核昔酸和氨基酸的同源性分别为97.4一994%和%.3一99.1%。HA裂解位点与其它类Gs/Gdi%HSNI病毒一样，都有6个碱性氨基酸的插入，连接肤的序列也为RERRRKKR模式。在HAI上都有5个潜在的糖基化位点，而D招Yzl30/03、Ckljs550/03和C灯Js560/03在HAI的154位上有另外一个糖基化位点。NA基因与Gs/G山96 HSNI病毒NA基因也有较高的同源性(96.2一96.8%)，也在同一个进化分支中，并演变为一个独立的亚分支。6株病毒的NA核昔酸和氨基酸的同源性也相当高，分别为97.7一99.9%和%.8一1 00.0%。与钱忠明:华东地区家鸭中禽流感病毒的分布以及HS亚型禽流感病毒HA分子流行病学业Gs/G山96 HSNI病毒相比，不同的是在这6株病毒NA的第49一68位上有20个氨基酸的缺失，同时也失去了4个潜在的糖基化位点。致病性和传播性试验的结果显示，高剂量的Gs丹260/03 HS亚型病毒(1护EIDS。)能引起鹅全身性感染，并引起100%的死亡率(4一7天)，同时经密切接触传播的鹅也有50%以上的死亡率(4一7天)，经气管和泄殖腔排毒至少7天以上。Gs/Y 260/03病毒可通过感染鹅的粪便和被污染的水直接传播给鸡，引起鸡100%的发病率和死亡率(3一7天)，而空气传播途径不能引起鸡的发病和死亡。高剂量的Dk/Yz3 12/03病毒(1护EIDS。)虽然不能引起家鸭明显的临床症状和死亡，但在接种后的第三天能从包括大脑、法氏囊在内的大部分组织器官中检测到HS亚型病毒，组织病理学也证实这些组织器官有不同?

全文目录

中文摘要  3-7
英文摘要  7-11
目录  11-12
符号说明  12-14
综述: 禽流感病毒的流行病学和致病性  14-49
  1 A型流感病毒的特性  14-21
  2 A型流感病毒的宿主  21-25
  3 禽流感病毒的种间传播  25-30
  4 禽流感病毒宿主范围限制性的分子决定因素  30-32
  5 禽流感病毒的致病性及其决定因素  32-41
  6 高致病性禽流感  41-44
  7 香港禽流感流行病学研究进展  44-49
第一章华东地区家鸭中不同HA亚型禽流感病毒的分布  49-67
  1 材料和方法  50-53
  2 结果  53-63
  3 讨论  63-67
第二章鸭源、鹅源和鸡源H5亚型禽流感病毒的特性  67-85
  1 材料和方法  68-72
  2 结果  72-82
  3 讨论  82-85
第三章不同来源H5亚型禽流感病毒HA基因的遗传发生分析  85-104
  1 材料和方法  86-89
  2 结果  89-100
  3 讨论  100-104
结论  104-105
附图  105-113
参考文献  113-128
致谢  128

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