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肿瘤坏死因子凋亡相关配体基因的克隆、表达纯化以及生物活性的初步研究

作　者: 苏海川
导　师: 范清宇
学　校: 中国人民解放军第四军医大学
专　业: 外科学
关键词: TRAIL 克隆表达纯化活性测定动物肿瘤模型
分类号: R346
类　型: 博士论文
年　份: 2003年
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内容摘要

肿瘤坏死因子相关配体属于肿瘤坏死因子(TNF)家族，是继TNFα，FasL之后新发现的具有介导细胞凋亡能力的存在于细胞表面的细胞因子配体，在多种组织和细胞中广泛表达。和TNF家族的其他成员不同的是，TRAIL在体内仅以膜结合型存在。体外实验表明，无论膜结合型的还是可溶型的TRAIL，都能迅速诱导表达TRAIL特异受体的细胞发生凋亡。近年来的研究表明，TRAIL在体内、体外均有很强的肿瘤特异性杀伤作用，是一个具有治疗恶性肿瘤潜在应用价值的基因工程药物。我们以中国人外周血淋巴细胞总RNA为模板，扩增TRAIL的胞外区(sTRAIL)，插入原核表达载体，转化大肠杆菌后，成功地表达了sTRAIL蛋第四军医大学博士学位论文白，并进行了纯化和初步的功能性研究，现将结果报告如下。1．以正常人外周血淋巴细胞总RNA为模板，成功地扩增了 TRAIL的胞外区CDNA，并克隆到原核表达载体中2．运用PCR技术改造所获得的CDNA片断，针对所用表达载体在 SIRAIn CDNA片断 5’和 3’端分别设计并引人两对酶切位点 EcORI和 BalnHI…BV220载体）及 Ndel和 BalnHI （PRSE八载体），构建了 2个 SIRAIL原核表达载体： pBV220lSIRAIL，pRSET－AjTRAIL3．分别通过用温度和IPTG诱导，成功地使2个表达载体在原核系统中高效表达并纯化。免疫印迹杂交表明表达的蛋白具有 T巴利亚抗原性。4．MTI’法测试表明：体外肿瘤细胞杀伤实或明该蛋白可以有效地杀伤肿瘤细胞，对正常人体细胞无毒副作用。5．用成骨肉瘤细胞系（SOSP－9607及 SOSP－9901）制作荷瘤裸鼠模型，s侧IL蛋白可以有效的抑制荷瘤裸鼠体内2种实体瘤的生长，抑制率分别达到61％及63．3％。

全文目录

英文缩略词表  5-7
中文摘要  7-9
英文摘要  9-11
文献回顾  11-43
  基因工程药物的概念及发展  11-15
  基因工程药物在疾病治疗中的应用  15-25
  肿瘤坏死因子相关凋亡配体的研究  25-43
实验研究  43-66
  肿瘤坏死因子相关凋亡配体基因的克隆及表达载体的构建  47-52
  肿瘤坏死因子相关凋亡配体原核表达及纯化  52-61
  肿瘤坏死因子相关凋亡配体表达蛋白生物活性的初步研究  61-66
小结  66-67
附图  67-75
参考文献  75-89
致谢  89-91

肿瘤坏死因子凋亡相关配体基因的克隆、表达纯化以及生物活性的初步研究

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