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FK506及神经干细胞对异体神经移植作用的研究

作　者: 李明新
导　师: 阚世廉
学　校: 天津医科大学
专　业: 外科学
关键词: 胎鼠血清培养基神经干细胞 FK506 神经异体移植
分类号: R651.3
类　型: 博士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

第一部分大鼠胚胎脑组织神经干细胞分离、培养和鉴定目的体外无血清条件下分离、培养胚鼠神经干细胞，观察其生长及分化情况，为进行神经干细胞移植创造基础。方法通过采用机械分离和消化分离相结合的方法，取孕14～16dSD系大鼠的胚胎海马组织，在含EGF、bFGF和B27的DMEM/F12培养基中培养、传代，进行神经干细胞的单细胞克隆培养，显微镜下观察其增殖分化过程，并对原代和传代培养的细胞进行Nestin免疫荧光染色，鉴定是否为神经干细胞，神经干细胞诱导分化后应用NSE及GFAP抗体进行鉴定。结果鼠脑组织中成功培养出神经干细胞，在无血清培养基中细胞不断分裂增殖，8d左右就可以形成胞体透亮、折光性好的干细胞球，细胞免疫荧光染色证实细胞系巢蛋白阳性，并能在体外传代培养和连续形成克隆；经血清培养液诱导分化后部分呈NSE阳性，部分呈GFAP阳性。克隆的诱导及分化实验表明，克隆具有多分化能力，神经元标志物NSE、星性胶质细胞的标志物GFAP的检测结果均呈阳性。结论分离和培养的细胞能表达神经干细胞的特异性标志物巢蛋白，并且具有很强的增殖能力和多向分化潜能，说明新生大鼠海马存在神经干细胞，并可进一步用于神经干细胞移植治疗疾病的研究。第二部分FK506及神经干细胞对异体神经移植生长的作用目的探讨FK506及神经干细胞对异体神经移植生长的影响。方法共使用50只大鼠，其中Brown-Norway(BN)大鼠10只，作为神经移植的供体；Lewis(L)大白鼠40只，随机分成四组，每组10只，左侧坐骨神经切断后，造成1cm缺损，采用Brown-Norway大鼠坐骨神经1cm移植修复；A组未施加干预因素，B组植入神经干细胞，D组注射FK506，C组同时应用神经干细胞及注射FK506(神经干细胞预先用BrdU标记)。术后12周，行后肢运动及感觉评估，进行肌电图检查神经传导情况；取下组织后进行坐骨神经组织学检查、腓肠肌湿重测定，并采用抗体GFAP、BrdU进行免疫组织化学检查，观察在蛋白水平变化，后进行NGF及GAP-43的原位杂交检查，在mRNA水平检测干预因素对异体神经移植的作用。结果同时接受神经干细胞及注射FK506组，其短期内出现体重恢复慢、进食差及少动，但6周后腓肠肌湿重优于其他组，坐骨神经肌电图检查及组织形态恢复优于单独接受神经干细胞或FK506组及对照组；免疫组化结果显示：同时接受神经干细胞及注射FK506组GFAP及BrdU表达高于其他组，移植干细胞组显示BrdU高表达，原位杂交结果显示同时接受神经干细胞及注射FK506组NGF及GAP-43表达高于其他组。结论FK506结合神经干细胞对异体神经移植生长具有促进作用，在周围神经缺损较多时可提供一种选择，减少致残率。

全文目录

中文摘要  4-6
Abstract  6-10
符号说明  10-13
前言  13-19
  研究现状、成果  13-17
  研究目的、方法  17-19
一、神经干细胞的培养和鉴定  19-41
  1.1 对象和方法  19-26
  1.2 结果  26-36
  1.3 讨论  36-40
  1.4 小结  40-41
二、异体神经移植联合应用神经干细胞及FK506  41-80
  2.1 对象和方法  41-49
  2.2 结果  49-63
  2.3 讨论  63-78
  2.4 小结  78-80
结论  80-81
参考文献  81-95
发表论文和参加科研情况说明  95-96
综述  96-122
  FK506对神经移植的作用  96-111
  综述参考文献  111-122
致谢  122-123

FK506及神经干细胞对异体神经移植作用的研究

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