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VEGF转染NSCs治疗新生脑瘫大鼠的实验研究

作　者: 谭洁璐
导　师: 郑湘榕
学　校: 中南大学
专　业: 儿科学
关键词: 新生大鼠 VEGF 神经干细胞 脑性瘫痪 移植
分类号: R742.3
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 21次
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内容摘要


脑性瘫痪(cerebral palsy, CP)简称脑瘫,是目前小儿最主要的运动功能伤残性疾病。目前对于CP的治疗仅限于对症支持,缺乏特效治疗,故CP仍为当今小儿健康发育研究领域的重要课题之一。神经干细胞(neural stem cells, NSCs)具有自我更新、高增殖能力和多种分化潜能,近年来,NSCs被发现具有低免疫原性、能整合于宿主细胞及长期稳定表达外源基因的优点而成为转基因治疗的理想载体细胞。血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)能特异性地作用于血管内皮细胞,加速新生血管的形成,此外,VEGF还直接作用于神经细胞,具有神经营养及神经发生作用。已有研究表明,将转染VEGF基因的NSCs移植治疗暂时性成年鼠脑缺血,发现转染VEGF基因的NSCs可在宿主脑组织中移行和表达基因产物,并对宿主局部血管和神经结构具有保护作用。迄今为止,尚未见VEGF转染NSCs移植治疗新生CP大鼠的报道。目的：本实验拟探讨VEGF转染NSCs移植对新生脑瘫大鼠的神经保护作用。方法：本研究室既往已经构建携带VEGF165基因的重组慢病毒载体pGC-FU-VEGF165,并感染体外分离培养的NSCs。本实验首先使用Rice法制作新生CP大鼠动物模型,并通过神经行为学及脑组织病理形态学对模型进行鉴定。将7日龄SD大鼠随机分成5组,假手术组(CON组)、脑瘫模型组(CP组),脑瘫模型联合缓冲液移植组(PBS组)、脑瘫模型联合VEGF转染NSCs移植治疗组(VEGF+NSCs组)脑瘫模型联合NSCs移植治疗组(NSCs组)。PBS组、VEGF+NSCs组、NSCs组在CP模型后3d于大鼠左侧感觉运动皮层区分别立体定位注射2μL缓冲液、转染NSCs的携带VEGF基因的重组慢病毒载体(病毒感染复数moi值为50TU／个细胞,NSCs细胞个数*104/ul)、NSCs悬液(NSCs细胞个数5*104／ul)。14日龄时观察大鼠体重增长情况,采用VEGF免疫组织化学法检测鼠脑组织VEGF蛋白表达；3-4周龄时采用放射形迷宫觅水试验、握持试验及足错误试验进行神经行为学测试；35日龄采用HE染色法观察鼠脑组织病理学。结果：第一部分应用单侧颈总动脉结扎结合缺氧的方法制作新生CP大鼠,CP组动物握持时间较对照组缩短,足错误次数较对照组增加,HE染色提示CP组存在不同程度的脑损伤,证实CP模型动物存在神经行为学及脑组织病理学的改变；第二部分1.体重增长率测定：VEGF+NSCs组、NSCs组体重增长率明显高于CP组和PBS组(P<0.05)；2.鼠脑组织VEGF免疫组化检测：VEGF+NSCs组、NSCs组的VEGF免疫组化阳性细胞数较CP组和PBS组明显增加(P<0.05),VEGF+NSCs组较NSCs组VEGF阳性细胞数增加(P<0.05)；3.放射形迷宫觅水试验：①觅水时间比较：VEGF+NSCs组、NSCs组的觅水时间较CP组和PBS组明显缩短(P<0.05),VEGF+NSCs组较NSCs组觅水时间缩短(P<0.05)；②觅水错误次数：VEGF+NSCs组、NSCs组的觅水错误次数较CP组及PBS组明显减少(P<0.05),VEGF+NSCs组较NSCs组错误次数减少(P<0.05)；③觅水重复次数：VEGF+NSCs组、NSCs组的觅水重复次数较CP组及PBS组明显减少(P＜0.05),VEGF+NSCs组与CON组之间差异无统计学意义(P>0.05)；4.握持试验结果：VEGF+NSCs组、NSCs组的握持时间较CP组和PBS组明显延长(P＜0.05)；5.足错误试验：VEGF+NSCs组、NSCs组的错误次数较CP组和PBS组明显减少(P<0.05)；6.脑组织HE染色显示：CP组和PBS组鼠脑组织细胞排列紊乱,神经细胞减少、变性坏死,胶质细胞增生；VEGF+NSCs组、NSCs组细胞变性坏死减轻,偶见核固缩。结论：使用VEGF转染NSCs移植治疗新生脑瘫大鼠,可增加新生鼠脑组织VEGF蛋白的表达,减轻缺氧缺血性脑损伤,改善远期学习记忆功能,具有神经保护作用。

全文目录


摘要  5-8
Abstract  8-12
目录  12-13
英文缩略词简表  13-14
前言  14-16
第一部分 新生脑瘫大鼠模型的制作与鉴定  16-23
  1 材料与方法  16-19
  2 结果  19-21
  3 讨论  21-22
  4.小结  22-23
第二部分 VEGF转染NSCs移植对新生脑瘫大鼠的治疗作用  23-38
  1.材料与方法  23-27
  2.结果  27-35
  3.讨论  35-37
  4.小结  37-38
附图  38-42
参考文献  42-47
综述  47-55
  参考文献  52-55
致谢  55-56
攻读学位期间主要研究成果  56

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中图分类: > 医药、卫生 > 神经病学与精神病学 > 神经病学 > 脑部疾病 > 大脑性瘫痪
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