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4.1蛋白家族在不同来源小鼠脑源性NSCs及其分化细胞中的表达

作　者: 周贺
导　师: 邢莹
学　校: 郑州大学
专　业: 生理学
关键词: 神经干细胞 APP转基因小鼠 4.1蛋白家族阿兹海默病
分类号: Q26
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 4次
引　用: 0次
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内容摘要

4.1蛋白是红细胞膜蛋白经聚丙烯酰胺凝胶电泳后出现的第4.1条显色带,是红细胞膜骨架基本成分之一,其家族成员有4.1R、4.1G、4.1N和4.1B。有研究表明,4.1蛋白家族对维持红细胞膜的完整性十分重要,在其他组织中参与细胞和细胞之间以及细胞和细胞基质之间的连接,同时与细胞内信号分子和酶能够相互作用。4.1蛋白家族通过与肌动蛋白、血影蛋白等蛋白相互作用维持细胞的正常形态和完整性,参与了细胞的生长调节和神经细胞突触的形成过程,也可能参与了神经细胞的发育过程。阿兹海默病(AD)是一种神经系统退行性疾病。主要病理学特征是在大脑皮层和海马区域形成大量的老年斑(SP)和神经元纤维缠结(NFT)以及出现弥漫性脑萎缩,脑皮层和海马区神经细胞减少。SP的主要成分β-淀粉样多肽(amyloidβpeptide,Aβ)由淀粉样前体蛋白(amyloid precursorprotein,APP)代谢产生。本研究通过观察4.1蛋白家族各成员在正常小鼠和APP转基因鼠(阿兹海默病模型鼠)来源的小鼠脑源性神经干细胞及其分化细胞中的表达情况,以期进一步了解4.1蛋白在神经细胞发育过程中可能起到的作用,同时本研究对于探讨阿兹海默病等神经退行性病变的病理学机制也有着重要意义。方法:分离培养新生正常C57小鼠、APP转基因阳性和阴性小鼠(阿兹海默病模型鼠)脑源性神经干细胞并进行传代;检测nestin的表达以鉴定神经干细胞;进行诱导分化后检测GFAP和NSE的表达以确认分化而来的细胞是否为神经细胞;通过免疫细胞化学方法检测4.1蛋白家族4个成员4.1R、4.1G、4.1N和4.1B在神经干细胞分化各阶段的表达情况;通过RT-PCR方法半定量检测4.1蛋白家族4个成员mRNA的表达。结果:(1)从新生小鼠脑组织分离的细胞在培养过程中能够形成大量悬浮的克隆球,并可传代培养。检测细胞增殖活性表明这些克隆球可在体外扩增,神经干细胞数量随着时间延长而增加(P＜0.05)。经免疫细胞化学鉴定,神经球Nestin抗体标记阳性,4.1R、4.1G、4.1N和4.1B,4种蛋白均有阳性表达,分化后的细胞表达神经元特异性抗原NSE和星型胶质细胞的特异性抗原GFAP。(2)分别在三种来源的神经干细胞分化第5,10,15天后用免疫细胞化学方法检测4.1R、4.1G、4.1N和4.1B的表达,各实验组随着分化时间的延长4种蛋白的表达均有升高,各实验组内不同时间点蛋白阳性表达评分差异具有统计学意义(P＜0.05)。(3)在三种来源的神经干细胞分化15天时检测4.1R、4.1G、4.1N和4.1B4种蛋白的表达,APP阳性鼠组中4.1R、4.1G、4.1N和4.1B蛋白的表达均较APP阴性鼠组和正常组为高(P＜0.05),APP阴性鼠组和正常组之间4.1R、4.1G、4.1N和4.1B蛋白表达均无显著性差异(P＞0.05)。(4)在三种来源的神经干细胞分化15天时检测4.1R、4.1G、4.1N和4.1B的mRNA相对表达量,APP阳性鼠组4.1R、4.1G、4.1N和4.1BmRNA相对表达量均较APP阴性鼠组和正常组为高(P＜0.05),APP阴性鼠组和正常组之间4.1R、4.1G、4.1N和4.1B的mRNA相对表达量均无显著性差异(P＞0.05)。结论:4.1蛋白家族各成员在正常小鼠和APP转基因鼠脑源性神经干细胞及其分化细胞中均有表达,4.1R、4.1G、4.1N和4.1B在APP阳性鼠来源的神经细胞中表达水平高于正常鼠实验组和APP阴性鼠实验组,提示4.1蛋白有可能与APP等阿兹海默病相关蛋白存在相互作用并参与阿兹海默病的发病。

全文目录

摘要  3-5
ABSTRACT  5-9
正文  9-43
  4.1 蛋白家族在不同来源小鼠脑源性NSCs及其分化细胞中的表达  9-43
    引言  9-11
    材料与方法  11-23
    结果  23-27
    附图  27-31
    讨论  31-36
    结论  36-37
    参考文献  37-43
综述  43-62
  阿尔茨海默病分子病理机制与干细胞移植治疗现状  43-55
  参考文献  55-62
英文缩写词索引  62-64
致谢  64

4.1蛋白家族在不同来源小鼠脑源性NSCs及其分化细胞中的表达

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