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祛瘀解毒法对血瘀蕴毒型子宫内膜异位症卵泡液及颗粒细胞TNF-α、IL-6的研究

作 者: 李新玲
导 师: 连方
学 校: 山东中医药大学
专 业: 中医妇科学
关键词: 子宫内膜异位症 祛瘀解毒颗粒 卵泡液 颗粒细胞 NF-α IL-6
分类号: R271.9
类 型: 博士论文
年 份: 2008年
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内容摘要


目的:观察祛瘀解毒颗粒结合辅助生殖技术(ART)治疗血瘀蕴毒型子宫内膜异位症不孕的疗效并探讨其作用机理,试图开辟中医药治疗EM不孕的新思路,为临床有效治疗该病提供依据。方法:临床研究:60例子宫内膜异位症(EM)不孕患者随机分为治疗组和对照组,每组30例。治疗组有20例口服祛瘀解毒颗粒结合氯米芬(CC)促排卵+宫腔内人工授精(IUI);另外10例口服祛瘀解毒颗粒同时行IVF-ET。对照组有20例单纯给CC促排卵+IUI,另外10例行IVF-ET。观察治疗前后血瘀蕴毒证候积分变化、妊娠率、免疫及内分泌学相关指标、血清和卵泡液TNF-α、IL-6含量以及卵巢颗粒细胞TNF-αmRNA、IL-6mRNA的表达情况。实验研究一:40例EM模型大鼠随机分为试验组、观察组各20例,另取20只大鼠只牵拉子宫作为空白组。试验组每天给予祛瘀解毒颗粒溶于2ml生理盐水灌胃,观察组和空白组均给予2ml生理盐水,连续灌胃3周。末次给药后24h各组大鼠均给予人绝经后促性腺激素(HMG)50IU腹腔注射,48h后给予人绒毛膜促性腺激素(HCG)100IU/100g,14~16h后处死大鼠收集卵细胞及颗粒细胞团,观察优质卵细胞数目及优质卵细胞率,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测卵巢颗粒细胞TNF-αmRNA、IL-6mRNA表达。实验研究二:配制不同的培养液,对20只小鼠超排卵共收集189枚2-细胞鼠胚分别放入各组培养液进行培养。其中治疗组培养液为P-1胚胎培养液加10%SSS加10%治疗组EM患者卵泡液;对照组为培养液P-1胚胎培养液加10%SSS加10%对照组EM患者卵泡液;空白组培养液为P-1胚胎培养液加10%SSS加10%空白组人卵泡液。每日在显微镜下观察小鼠胚胎情况。结果:1.祛瘀解毒颗粒能够有效改善患者血瘀蕴毒证候,提高妊娠率,降低EMAb的阳性率及CA125水平,改善内分泌状态,降低患者血清及卵泡液TNF-α、IL-6的含量,降低卵巢颗粒细胞TNF-αmRNA、IL-6mRNA的表达,效果明显优于对照组(P<0.05)。2.试验组大鼠优质卵细胞数目、优质卵细胞率明显高于观察组(P<0.05),颗粒细胞TNF-αmRNA、IL-6mRNA表达明显低于观察组(P<0.05)。3.小鼠2-细胞胚胎在治疗组及空白组培养液中发育到8-细胞期、桑葚胚及囊胚及优质胚胎的比率均明显高于对照组(P<0.05)。结论:祛瘀解毒颗粒可以改善血瘀蕴毒症候,提高EM不孕患者妊娠率,是治疗血瘀蕴毒型子宫内膜异位症的有效药物。推测其作用机理可能与调节免疫功能,改善内分泌状态,降低卵泡液TNF-α、IL-6水平及颗粒细胞TNF-αmRNA、IL-6mRNA表达等有关,通过旁分泌或(和)自分泌方式直接或间接参与卵巢功能的局部调节,改善卵子生存的内环境,提高卵细胞质量,减少对胚胎的毒性作用,从而提高EM患者妊娠率。

全文目录


提要  3-5
Abstract  5-10
引言  10-11
文献研究  11-19
  一、现代医学对子宫内膜异位症不孕的研究进展  11-16
    (一) 现代医学对子宫内膜异位症致不孕病因认识  11-14
    (二) 现代医学对子宫内膜异位症致不孕治疗认识  14-16
  二、中医学对子宫内膜异位症不孕的研究进展  16-19
    (一) 中医对子宫内膜异位症病因病机认识  16-17
    (二) 中医对子宫内膜异位症不孕治疗认识  17-19
临床研究  19-43
  技术路线图  19-20
  一、研究对象  20-23
    (一) 病例来源  20
    (二) 诊断标准  20-21
    (三) 病例选择标准  21
    (四) 症状分级量化评分标准  21-22
    (五) 观察项目  22-23
  二、研究方法  23-27
    (一) 临床分组  23
    (二) 药物、实验室设备及培养液  23-24
    (三) 用药方法  24
    (四) 标本的收集  24
    (五) 颗粒细胞TNF-Α、IL-6MRNA 表达量的定量测定  24-27
    (六) 统计学分析  27
  三、一般资料  27-28
    (一) 治疗组、对照组及空白组患者年龄(岁)分布比较(见表3)  27
    (二) 治疗组与对照组患者病程(年)比较(见表4)  27
    (三) 治疗组与对照组孕产史分布比较(见表5)  27-28
    (四) 治疗组与对照组患者治疗前血瘀蕴毒证候积分比较(见表6)  28
    (五) 治疗组与对照组治疗前基础内分泌的比较(见表7)  28
  四、研究结果  28-32
    (一) 治疗组与对照组患者治疗前后血瘀蕴毒证候积分变化比较(见表8)  28-29
    (二) 治疗组与对照组妊娠率的比较(见表9)  29
    (三) 治疗组与对照组氯米芬结合IUI 妊娠率的比较(见表10)  29-30
    (四) 治疗组、对照组及空白组IVF 控制超促排卵结果(见表11)  30
    (五) 治疗组与对照组治疗前后黄体期内分泌指标比较(表12)  30-31
    (六) 治疗组与对照组治疗前后外周血EMAB 效价比较(表13)  31
    (七) 治疗组与对照组治疗前后血清CA125、TNF-Α、IL-6 含量的比较(表14)  31
    (八) 治疗组、对照组及空白组卵泡液TNF-Α、IL-6 的比较(表15)  31-32
    (九) 治疗组、对照组及空白组颗粒细胞TNF-ΑMRNA、IL-6MRNA 表达的比较(表 16)  32
  五、讨论  32-43
    (一) 血瘀蕴毒病机的建立与子宫内膜异位症的关系  32-35
    (二) 祛瘀解毒颗粒组成与应用基础  35-37
    (三) 研究结果分析  37-43
实验研究  43-58
  技术路线图  43-45
  实验一 祛瘀解毒颗粒对子宫内膜异位症模型大鼠卵巢颗粒细胞TNF-ΑMRNA、 IL-6MRNA 表达的影响  45-53
    一、材料与方法  45-49
      (一) 药物与试剂  45-46
      (二) 实验仪器与设备  46
      (三) 引物设计与合成  46-47
      (四) 实验动物  47
      (五) 实验方法  47-49
    二、实验结果  49-51
      (一) 祛瘀解毒颗粒对EM 大鼠优质卵数以及优质卵率的影响(见表18)  49-50
      (二) 祛瘀解毒颗粒对EM 大鼠颗粒细胞TNF-ΑMRNA 表达的影响(见表19)  50
      (三) 祛瘀解毒颗粒对EM 大鼠颗粒细胞IL-6MRNA 表达的影响(见表20)  50-51
    三、讨论  51-53
      (一) EM 模型大鼠优质卵细胞数目和优质卵细胞率分析  51-52
      (二) EM 模型大鼠卵巢颗粒细胞TNF-Α、IL-6 分析  52-53
  实验二 子宫内膜异位症患者卵泡液对小鼠胚胎发育影响的研究  53-58
    一、材料与方法  53-55
      (一) 实验动物  53
      (二) 药物与试剂  53
      (三) 实验仪器与设备  53
      (四) 实验方法  53-54
      (五) 统计学分析  54-55
    二、实验结果  55
      (一) 早期鼠胚在三种培养液中发育情况比较(见表21)  55
      (二) 早期鼠胚优质胚胎数目及优质胚胎率的比较(见表22)  55
    三、讨论  55-58
      (一) EM 患者卵泡液对早期鼠胚体外培养的影响  56
      (二) 祛瘀解毒颗粒治疗后EM 患者卵泡液对早期鼠胚体外培养的影响  56-58
结语  58-59
参考文献  59-67
附录  67-71
致谢  71-72
查新报告  72-80

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