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AKT2调节肾癌细胞转移及其临床意义的研究

作　者: 李春香
导　师: 姚欣
学　校: 天津医科大学
专　业: 肿瘤学
关键词: AKT2 肾癌趋化运动转移预后
分类号: R737.11
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的：探讨AKT2在肾癌组织中的表达情况及其临床意义,体外实验中,应用小RNA干扰技术降低AKT2的表达对肾癌细胞迁移和侵袭能力的影响,明确AKT2在肾癌细胞转移中的作用。方法：1.用免疫组化的试验方法检测AKT2在肾癌组织中的表达情况,统计分析AKT2表达与各临床病理参数之间的相关性,统计AKT2的临床意义。2.利用小RNA干扰技术,应用合成的小RNA干扰质粒转染肾癌细胞ACHN,建立AKT2稳定降表达细胞系,用Western blotting技术检测转染效率。3.用趋化运动实验和划痕实验检测AKT2降表达对肾癌细胞运动能力的影响。4.体外侵袭实验检测AKT2降表达对肾癌细胞侵袭能力的影响。5.用黏附实验检测AKT2降表达对肾癌细胞黏附能力的影响。采用磷酸化特异性抗体检测AKT2降表达对EGF刺激后integrinβ1磷酸化水平的影响。6.采用磷酸化特异性抗体检测AKT2降表达对EGF刺激后肌动蛋白结合蛋白cofilin磷酸化水平的影响。7.用Western Blotting方法检测AKT2降表达对PKCζ活化程度的影响,进一步明确AKT2在肾癌细胞趋化运动中作用的分子机制。结果：1.AKT2在不同类型肾癌组织表达阳性率不同,透明细胞癌阳性率40.6%(54/133),乳头状肾细胞癌的阳性率34.6%(28/81),嫌色细胞癌阳性率63.3%(31/49),差异有显著性(P<0.05)。2.透明细胞癌、乳头状肾细胞癌AKT2高表达与肿瘤分级、分期、转移均相关(P<0.05),而嫌色细胞癌中AKT2高表达只与肿瘤分期有关,与转移、预后无关。Log-rank, Kaplan-Meier生存曲线分析透明细胞癌、乳头状肾细胞癌AKT2高表达均与预后不良相关(P<0.05)。3.小RNA干扰技术转染肾癌细胞ACHN后,建立AKT2稳定降表达细胞系,Western Blotting检测AKT2蛋白水平表达明显下降。4.AKT2降表达的ACHN细胞的趋化运动能力比对照组细胞明显减弱(P<0.05)。5.AKT2降表达的ACHN细胞的侵袭能力比对照组细胞明显减弱(P<0.05)。6.AKT2降表达的ACHN细胞黏附能力比对照组细胞明显减弱(P<0.05),EGF刺激后integrinβ1磷酸化水平降低。7.AKT2降表达能够降低ACHN细胞cofilin的磷酸化水平。8.EGF刺激后降表达AKT2的表达减弱了PKCζ的活化程度。结论：1.AKT2在不同类型肾癌组织中表达不同；2.透明细胞癌、乳头状肾细胞癌的AKT2高表达与肿瘤分级、分期、转移、预后均具有相关性,而嫌色细胞癌AKT2高表达只与肿瘤分期有关,与其它各临床病理参数并无显著相关性；3.AKT2参与调控了EGF诱导的肾癌细胞的趋化运动和转移。4.AKT2有可能成为治疗转移性肾癌新的靶点。

全文目录

中文摘要  4-6
Abstract  6-9
符号说明  9-10
前言  10-13
  研究现状、成果  10-12
  研究目的、方法  12-13
对象和方法  13-25
  实验材料  13
  各实验所需主要试剂及溶液的配制  13-17
  主要仪器设备  17-18
  实验方法  18-24
  统计学分析  24-25
结果  25-40
  AKT2表达水平与不同类型肾癌各临床参数的相关性  25-29
  AKT2表达水平与CCRCC、PRCC预后不良相关  29-30
  利用小RNA干扰序列降低A KT2在肾癌细胞中的表达  30-31
  AKT2降表达减弱肾癌细胞的迁移  31-33
  AKT2降表达对肾癌细胞侵袭能力的影响  33-34
  AKT2降表达对肾癌细胞粘附能力的影响  34-37
  AKT2降表达对肾癌细胞cofilin磷酸化的影响  37-38
  AKT2调节PKCζ的磷酸化  38-40
讨论  40-43
小结  43-44
结论  44-45
参考文献  45-51
发表论文和参加科研情况说明  51-52
综述 PI3K/AKT/mTOR信号通路与肾癌的研究进展  52-64
  综述参考文献  61-64
致谢  64

AKT2调节肾癌细胞转移及其临床意义的研究

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