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Notch在中国卤虫不同发育时期的表达模式

作　者: 孙丽哲
导　师: 侯林
学　校: 辽宁师范大学
专　业: 海洋生物学
关键词: 中国卤虫 Notch基因整体免疫组化实时荧光定量PCR
分类号: Q954.4
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

中国卤虫(Artemia sinica)属于节肢动物门(Phylum Arthropoda),甲壳纲(Class Crustacea),鳃足亚纲(Subclass Branchiopoda),无甲目(Order Anostaca),卤虫科(Family Artemiidae),卤虫属(Genus Artemia)。是分布于内陆盐湖和海岸盐田中的小型甲壳动物。Notch信号通路是通过细胞间相互作用来调节生物体生长发育的一个十分保守的信号通路。Notch信号通路在脊椎动物和无脊椎动物的发育过程中,对细胞命运的决定、神经系统的发育、器官的形成及体节的发生都有重要的作用。在果蝇以及哺乳动物中Notch的信号通路已经进行了深入的研究。通过本实验的研究可以为Notch信号通路在卤虫中的研究提供参考价值。本研究根据美国卤虫Notch基因的EST片段序列,以中国卤虫cDNA为模板克隆出一条基因序列,利用NCBI序列同源性比对,结果显示该片段为Notch家族同源序列。结构域的分析结果表明,该序列具有Notch家族保守的ANK结构域。根据这段序列设计引物进行RT-PCR后采用染色体步移技术在3’端共扩增得到了881bp的片段。通过整体免疫组化技术对中国卤虫不同发育时期Notch基因的表达部位进行研究,结果发现0h,5h以及10h Notch在原肠胚和无节幼体早期的表达范围较广泛且平均,15h到40h Notch主要在卤虫无节幼体的头胸部表达,在20h到40h腹部两侧开始出现少量表达,3d这一时期的Notch表达部位主要集中在头胸部、腹部表面及肠道,5d的表达部位除集中在头胸部、腹部表面及肠道外,在附肢处也出现了部分表达,到7d时,附肢和腹部表面、头胸部、肠道内侧及体节成为了主要的表达部位。为了分析Notch的表达和胚胎发育的关系,本研究首次采用实时定量PCR分析了中国卤虫不同胚胎发育时期Notch基因的相对表达量,结果发现Notch在中国卤虫不同发育时期的表达量不同,在0小时到10天之间,出现两次高峰,以20h前后相对表达量最高,其余时期Notch表达量随器官发生与身体发育情况而变化。推测Notch在卤虫的胚胎发育与体节和器官的发生中起到重要的作用,对胚胎神经发育、细胞生长以及分化等一系列生理生化过程起到了一定的调节作用。

Notch在中国卤虫不同发育时期的表达模式

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