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骨髓间充质干细胞的定向与共培养体系诱导

作　者: 林鹏
导　师: 杨乃龙
学　校: 青岛大学
专　业: 内科学
关键词: 骨髓间充质干细胞转化胰腺诱导共培养体系
分类号: R329
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
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内容摘要

目的通过骨髓间充质干细胞的定向诱导，探讨其成脂、成神经等多分化潜能。利用共培养体系诱导骨髓间充质干细胞向胰岛祖细胞的初步转化，探讨骨髓间充质干细胞在糖尿病治疗领域的价值。方法骨髓间充质干细胞来源于5～10岁儿童胸骨骨髓血（排除造血系统疾病，经得家属同意）。Percoll淋巴细胞分层液分离骨髓间充质干细胞；第3代细胞经CD44抗体、CD45抗体、CD34抗体鉴定；第4代细胞采用含10^-8mmol／L地塞米松、10μg／L胰岛素的高糖DMEM（H-DMEM）诱导其向脂肪细胞分化，油红O染色鉴定脂肪细胞。碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）诱导其向神经祖细胞分化，经巢蛋白鉴定，继以1％二甲基亚矾（DMSO）的无血清H-DMEM诱导其形成神经网格样结构。胶原酶消化法获取流产胎儿胰腺间充质细胞，用添加bFGF的无血清低糖DMEM（L-DMEM）使其增殖，然后将胰腺间充质细胞接种于底层已接种骨髓间充质干细胞的Transwell内板（insert），共培养法诱导骨髓间充质干细胞向胰岛祖细胞的初步转化。建立骨髓间充质干细胞和神经干细胞共培养体系诱导神经干细胞分化为神经元。结果骨髓间充质干细胞体外经诱导可分化为脂肪细胞及神经细胞。胎儿胰腺间充质细胞中具有巢蛋白、CK-19阳性的胰腺干细胞，体外可分化形成胰岛样细胞团。共培养法可诱导骨髓间充质干细胞分化为PDX-1免疫反应阳性细胞。共培养体系能促进神经干细胞的分化。结论Percoll淋巴细胞分离液分离可获取骨髓间充质干细胞，体外诱导可分化为脂肪细胞、神经细胞。胎儿胰腺微环境能诱导骨髓间充质干细胞向胰岛祖细胞的转化。骨髓间充质干细胞分泌的一些物质对神经干细胞的分化具有促进作用。

全文目录

摘要  2-3
Abstract  3-5
引言  5-8
材料与方法  8-15
  1 试剂  8-9
  2 实验仪器  9-10
  3 液体配置  10-11
  4 实验操作  11-12
  5 实验步骤  12-15
结果  15-18
  1 骨髓间充质干细胞的分离培养  15
  2 生长曲线描述  15
  3 骨髓间充质干细胞的表面标志鉴定  15
  4 体外诱导骨髓间充质干细胞向脂肪细胞分化  15-16
  5 体外诱导骨髓间充质干细胞向神经细胞分化  16
  6 体外诱导骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化  16
  7 胰腺间充质细胞的原代培养  16
  8 共培养诱导  16-17
  9 共培养诱导神经干细胞分化为神经元  17-18
附图  18-20
讨论  20-22
结论  22-23
参考文献  23-25
综述  25-40
攻读学位期间的研究工作  40-41
致谢  41-42

骨髓间充质干细胞的定向与共培养体系诱导

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