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缺氧对二价金属转运体（DMT1）表达的影响

作　者: 张蕾
导　师: 朱俐
学　校: 南通大学
专　业: 航空、航天与航海医学
关键词: 低氧 Divalent Metal Transporter 1(DMT1) Hypoxia Inducible Factor-1 (HIF-1α) CoCl2 HepG2 PC12
分类号: R363
类　型: 硕士论文
年　份: 2006年
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内容摘要


目的：研究不同的缺氧方法对培养细胞二价金属转运体（Divalent metal transporter 1，DMTl）表达的影响，初步探讨低氧诱导因子1（Hypoxia inducible factor-1,HIF-1）与DMTl两种异构体（+IRE DMTl和-IRE DMTl）之间的关系。方法：用CoCl2诱导PC12细胞及HepG2细胞缺氧，检测DMTl的表达，确定对COCl2缺氧敏感的细胞株。在此基础上用Western Blot法检测低氧（1％O2）及呼吸链抑制剂叠氮钠（NaN3）和鱼藤酮（Rotenone）对该细胞株HIF-1α及DMTl表达的影响，用免疫细胞化学法检测低氧（1％O2）对HIF-1α及DMTl在该细胞内分布的影响。结果：1．用不同浓度的COCl2（0.025mM、0.05mM、0.125mM、0.25mM、0.5mM、1mM）处理PC12细胞4小时后，其+IRE DMTl的表达量与未用COCl2处理时相比，均无明显改变。2．HepG2细胞在经过不同浓度的COCl2处理4小时后，随着COCl2浓度的增加，HIF-1α及DMTl的两种异构体的表达均逐渐增加。当COCl2浓度为1mM时HIF-1α表达量最大，在COCl2浓度为0.5mM时+IRE DMTl和-IRE DMTl的表达量达到最高值。3．HepG2细胞HIF-1α在低氧（1％O2）处理1小时开始即有表达，3小时至6小时其表达量达到高峰。+IRE DMTl在低氧处理1小时也有增加，6小时达到最高峰。-IRE DMTl在低氧3小时开始表达有明显增加，6小时达到最高并持续至12小时处。4．HepG2细胞HIF-1α在低氧6小时有明显表达，复氧24小时后，HIF-1α被降解。复氧24小时后，+IRE DMTl的表达也明显少于单纯低氧6小时的表达量，而-IRE DMTl的表达量却无明显改变。5．HepG2细胞用NaN3处理1小时后，DMTl的两种异构体在NaN3浓度为10mM及20mM时，其表达量均比对照组明显增加；用rotenone处理24小时后，+IRE DMTl在rotenone浓度为20μM时，其表达量与对照组相比有明显的增加，-IRE DMTl在rotenone浓度为1μM及20μM时，其表达量与对照组相比均无明显改变；NaN3和rotenone都不能使HepG2细胞HIF-1α明显表达。6．在常氧环境中，DMTl两种异构体在HepG2细胞胞浆及胞核中均匀分布，HIF-1α无明显表达。低氧（1％O2）可使+IREDMTl聚集于胞浆及核膜上，而原本位于胞浆中的-IRE DMTl更趋向于胞膜，胞核中的-IRE DMTl也有向核膜集中的趋势，但不如+IRE DMTl明显，HIF-1α则在细胞核中大量表达。结论：1．CoCl2和低氧（1％O2）可使HepG2细胞的HIF-1α蓄积和DMTl两种异构体的表达增加，并且三者的变化趋势基本一致，提示DMTl的表达可能受到HIF-1的调控，DMTl可能是HIF-1的下游基因。2．NaN3和rotenone虽不能使HepG2细胞HIF-1α产生蓄积，但却能使DMTl的表达发生变化，提示DMTl表达的调控可能除HIF-1之外还有其它的调控途径。3．低氧（1％O2）可使HepG2细胞+IRE DMTl和-IRE DMTl在细胞内的分布发生不同的改变，提示低氧对DMTl两种异构体在细胞内分布的调节不同，这可能与两种异构体的功能不完全一致有关。

全文目录


英文缩略词表  6-9
摘要  9-11
Abstract  11-14
论文  14-54
  缺氧对二价金属转运体(DMT1) 表达的影响  14-54
    引言  14-17
    材料与方法  17-30
    结果  30-45
    讨论  45-49
    结论  49
    参考文献  49-54
致谢  54-55
附图  55-58
综述  58-71
  低氧/缺血与脑铁代谢的关系  58-71

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中图分类: > 医药、卫生 > 基础医学 > 病理学 > 病理生理学
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