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阿米洛利通过自噬途径保护PC12细胞的研究

作　者: 张润娉
导　师: 张正春
学　校: 苏州大学
专　业: 神经病学
关键词: 阿米洛利 PC12细胞 自噬-溶酶体通路 帕金森病
分类号: R329
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 24次
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内容摘要


目的:1观察酸处理对PC12细胞存活率、乳酸脱氢酶(LDH)漏出率、凋亡率以及胞内游离钙离子浓度的影响,并观察阿米洛利(amiloride,Ami)对酸处理所致细胞损伤的拮抗作用;2观察MPP~+对PC12细胞存活率、LDH漏出率、凋亡率以及胞内游离钙离子浓度的影响,并观察Ami对MPP~+所致细胞损伤的拮抗作用;3分析酸处理及MPP~+对PC12细胞自噬-溶酶体通路(autophagy-lysosome pathway, ALP)的影响,并观察Ami的拮抗作用。方法:分别用酸性(pH6.0)培养基或MPP~+处理PC12细胞24 h,同时给予Ami进行干预:MTT法检测细胞存活率;LDH试剂盒检测上清液中的LDH活性;流式细胞技术检测细胞凋亡率和胞内钙离子浓度;Western blot分析LC-II、LAMP2a表达水平的变化。结果:1酸性培养液(pH6.0)处理24h,细胞存活率显著降低(P<0.001),上清液中LDH的漏出率显著升高(P<0.001),细胞凋亡率升高(P<0.001),细胞内游离钙离子浓度也明显升高(P<0.05);100μM的Ami有效提高了细胞存活率(P<0.001),降低LDH漏出率(P<0.001),并抑制了细胞凋亡(P<0.001)和钙内流(P<0.01);2 MPP~+处理24h,细胞存活率显著降低(P<0.001),上清液中LDH漏出率显著升高(P<0.001),细胞凋亡率升高(P<0.05),细胞内游离钙离子浓度也明显升高(P<0.01);100μM的Ami有效提高了细胞存活率(P<0.001),降低上清液中LDH活力(P<0.001),并抑制了细胞凋亡(P<0.01)和钙内流(P<0.05);3酸性培养液和MPP~+处理24 h,LC3-II的表达显著受抑(P<0.01),LAMP2a的表达水平显著升高(P<0.05);Ami显著上调了LC3-II的表达(P<0.01),并下调了LAMP2a的蛋白表达水平(P<0.05)。结论:1. Ami对酸处理导致的PC12细胞损伤表现出良好的拮抗作用;2. Ami对MPP~+所致PC12细胞损伤具有良好的拮抗作用;3.酸处理及MPP~+均能导致PC12细胞的大自噬活性受抑制,同时分子伴侣自噬水平代偿性升高,Ami能有效增强大自噬的活性,拮抗分子伴侣自噬的异常激活。

全文目录


中文摘要  4-6
Abstract  6-10
引言  10-12
第一部分 Ami 对酸处理PC12 细胞具有保护作用  12-19
  1 实验材料  12-13
  2 实验方法  13-15
  3 统计  15
  4 结果  15-18
  5 小结  18-19
第二部分Ami 对MPP+处理的PC12 细胞有保护作用  19-24
  1 实验材料  19
  2 实验方法  19-20
  3 统计  20
  4 结果  20-23
  5 小结  23-24
第三部分Ami 对自噬-溶酶体途径的影响  24-29
  1 实验材料  24-25
  2 实验方法  25
  3 统计方法  25
  4 结果  25-28
  5 小结  28-29
讨论  29-34
结论  34-35
参考文献  35-38
综述  38-50
  参考文献  47-50
攻读学位期间公开发表的论文  50-51
中英文对照缩略词表  51-52
致谢  52-53

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中图分类: > 医药、卫生 > 基础医学 > 人体形态学 > 人体组织学
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