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心肺复苏后大鼠脑组织低氧诱导因子-1α、水通道蛋白-4表达变化及β-七叶皂甙钠干预作用的研究

作　者: 陈东升
导　师: 康健
学　校: 大连医科大学
专　业: 急诊医学
关键词: 心肺复苏脑水肿水通道蛋白4 低氧诱导因子α β-七叶皂苷钠
分类号: R459.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的:探讨大鼠心肺复苏,缺氧缺血性脑损伤(hypoxic—ischemic brain damageHIBD)后脑组织低氧诱导因子-1α、水通道蛋白-4(AQP4)的表达变化及β-七叶皂甙治疗对低氧诱导因子-1α、AQP4表达的影响及对脑神经细胞的保护作用。方法:将180只220-250g成年健康SD雄性大鼠随机分为假手术组、心肺复苏模型组(HIBD组)及心肺复苏后β-七叶皂甙治疗组。每组根据处死的时间不同分6个亚组:1h、3h、6h、12h、24h、48h组,每亚组各5只。心肺复苏后β-七叶皂甙治疗组在心肺复苏后后立即腹腔注射β-七叶皂甙(0.4 mg/kg体重),每12 h给药1次;假手术组、心肺复苏模型组(HIBD组)在相应时间点给予相同剂量的生理盐水(注:各组大鼠根据尿液的量给予同等量的生理盐水)。待动物苏醒,放回鼠笼饲养。术后注意观察大鼠生命体征变化及神经症状,根据不同时间点,对假手术组、心肺复苏模型组(HIBD组)及β-七叶皂甙治疗组每亚组各5只,从心尖进针入左心室深至主动脉根部,将右心耳处切开一小口,先后给予生理盐水(至流出澄清液)快速灌注、4%多聚甲醛(100ml)快速灌注后再缓慢灌注(200ml)。灌注结束后立即断头打开颅骨取出脑组织。进行AQP4、HIF-1α的免疫组化检测,对免疫组化的切片进行分析,将免疫组化的结果分为五级:不着色:阴性(-);淡黄色:弱阳性(+);黄色:阳性(++);棕黄色:中等阳性(+++);深棕黄色:强阳性(++++),同时应用400倍光镜,随机选择5个不同视野采用stratagene EagleEeyⅡ型图像分析处理系统进行定量分析;各亚组中一侧脑半球部分脑组织根据Eliott公式计算脑组织含水量,另一部分脑组织低温保存,进行qRT-PCR检测AQP4mRNA、HIF-1αmRNA的表达。结果:通过窒息方法建立心肺复苏模型,对实验大鼠各个不同时间段脑组织含水量及AQP4检测显示:心肺复苏模型组脑组织含水量明显增高,脑水肿反应明显,尤其6h最为严重,12h后组织含水量减少,脑水肿逐渐减轻,脑组织缺血缺氧AQP4蛋白的表达上调;对实验大鼠各个不同时间段脑组织AQP4、HIF-1α行免疫组化检测及qRT-PCR检测结果显示:假手术组AQP4、HIF-1α表达阴性,心肺复苏组AQP4表达上调,6小时AQP4达高峰,免疫组化显示阳性(+++),12h后AQP4的表达逐渐下降; HIF-1α于6小时达高峰,然后呈下降趋势,免疫组化6小时显示强阳性(++++)。β-七叶皂甙钠治疗组较心肺复苏组的脑组织水肿程度及AQP4表达在各个检测时间均有不同程度回落,HIF-1α表达增加。结论:心肺复苏后,脑组织含水量明显增高,AQP4、HIF-1α表达明显增强。AQP4、HIF-1α参与了HIBD脑水肿的发生发展过程;β-七叶皂甙钠通过抑制AQP4的表达、上调HIF-1α的表达,从而抑制心肺复苏后脑水肿的发生及发展,大大降低脑组织水肿对周围脑组织的损伤,从而起到脑神经细胞的保护作用,提高了心肺复苏后的脑功能的恢复。

全文目录

一、摘要  6-10
  （一）中文摘要  6-8
  （二）英文摘要  8-10
二、正文  10-33
  （一）前言  10-11
  （二）材料与方法  11-15
  （三）结果  15-25
  （四）讨论  25-29
  （五）结论  29-30
  （六）参考文献  30-33
三、文献综述  33-41
  （一）正文  33-38
  （二）参考文献  38-41
四、附录  41-42
五、致谢  42

心肺复苏后大鼠脑组织低氧诱导因子-1α、水通道蛋白-4表达变化及β-七叶皂甙钠干预作用的研究

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