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转Hu-IFN-α草鱼性腺发育的研究以及Hu-IFN-α在转基因草鱼体内的遗传

作　者: 王红权
导　师: 章怀云
学　校: 湖南农业大学
专　业: 水产养殖学
关键词: 人α-干扰素基因转基因草鱼性腺 ELISA PCR 草鱼出血病病毒
分类号: S917
类　型: 硕士论文
年　份: 2004年
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内容摘要

草鱼是我国主要的养殖品种之一，但其病害多，每年给我国淡水养殖业造成数亿元经济损失，尤其是病毒性的草龟出血病；因此草鱼抗病育种一直是我国水产工作者研究的重点。在草鱼抗病育种的初期，育种的方法多采用常规杂交和选择压力育种；到20世纪50年代末60年代初，随着细胞工程技术的发展，细胞工程在草鱼抗病育种上也得到了充分的运用。然而，这些育种技术均存在育种周期长、优良性状遗传不稳定等不足之处。随着DNA重组技术的发展，基因工程技术为这一目标的实现奠定了基础，这也为定向培育新的品种开辟了一条新途径。 1998年本课题组通过分子重组，将人α-干扰素（Human α-interferon，Hu-IFN-α）基因编码序列克隆到鲤鱼β-肌动蛋白基因启动子下游，构建成能在鱼体内组成型表达Hu-IFN-α的基因重组分子，采用显微注射法将Hu-IFN-α重组基因注射入草鱼1-2细胞期的受精卵，培育出转人α-干扰素基因草鱼，实验证明转人α-干扰素基因草鱼对草鱼出血病病毒的抗性比普通草鱼提高了66％。Hu-IFN-α基因作为鱼类一种新的转植基因，那么它对鱼类性腺发育及孵化是否存在影响，同时它在子一代中的遗传和表达情况如何?都值得研究。本文就这几个方面进行了研究和探索。 1．将处于不同发育时期的转基因草鱼性腺和相对应的普通草鱼性腺，作组织切片检查，以研究人α-干扰素基因对草鱼发育的影响：结果表明，人α-干扰素基因作为鱼类一种新的转植基因，它对鱼类性腺发育及孵化无显著影响。 2．随机抽取转人α-干扰素基因草龟F1代332尾，用ELISA检测法检测人-α干扰素基因在转基因草鱼F1代中的表达水平。结果表明，转人α干扰素基因草鱼F1代表达率为52.1％，但表达水平偏低。 3．通过PCR检测转基因草鱼F1代的阳性率：实验证明转人α-干扰素基因草鱼F1代阳性率为53.8％。 4．对转基因草鱼F1代接种草鱼出血病病毒(GCRV₉₉₁)，以研究转基因草鱼F1代对草鱼出血病病毒的抗性，攻毒实验表明转人α-干扰素基因草鱼F1代对草鱼出血病病毒抗性比普通草龟提高41.9％。

全文目录

前言  8-21
  1 研究的目的和意义  8-9
  2 鱼类转基因育种的研究现状  9-13
    2.1 转基因鱼常用的目的基因  10-12
    2.2 转基因鱼常用的方法  12
    2.3 外源基因的检测  12-13
    2.4 转基因技术在鱼类育种上取得的成绩  13
  3 草鱼出血病病毒及草鱼抗病育种研究进展  13-17
    3.1 草鱼出血病病毒研究概况  13-15
    3.2 草鱼抗病育种研究进展  15-17
    3.3 转人α-干扰素基因草鱼  17
  4 外源基因在转基因鱼中的整合  17-19
  5 转基因动植物的生物及食品安全性问题  19-21
材料与方法  21-35
  1 材料  21-26
    1.1 实验鱼  21
    1.2 草鱼出血病病毒  21
    1.3 主要仪器设备  21-22
    1.4 试剂盒  22
    1.5 酶制剂、抗生素、化学试剂及耗材  22-23
    1.6 试剂配制  23-26
  2 方法  26-35
    2.1 转基因草鱼的性腺发育情况研究  26-27
    2.2 转基因草鱼的孵化和培育  27-29
    2.3 转基因草鱼的标记及血样的获得  29-30
    2.4 夹心法ELISA检测Hu-IFN-α(酶联免疫法-蛋白质表达检测  30
    2.5 细菌(带有质粒PCI)菌种TOP10F′的活化和质粒DNA的提取  30-31
    2.6 转基因草鱼DNA的提取  31-32
    2.7 PCR检测  32-33
    2.8 转基因草鱼F1代对草鱼出血病病毒(GCHV991)的攻毒试验  33-35
结果与分析  35-42
  1 转基因草鱼的性腺发育  35-37
  2 转基因草鱼F1代的孵化和培育  37-38
  3 转基因草鱼F1代的ELISA检测  38-39
  4 转基因草鱼F1代的PCR检测  39-40
  5 转基因草鱼F1代的草鱼出血病病毒(GCHV-991)的攻毒结果  40-42
讨论  42-47
  1 人α-干扰素基因对转基因草鱼的性腺发育及孵化的影响  42
  2 转基因草鱼F1代人α-干扰素表达水平  42-44
  3 转基因草鱼F1代阳性率  44-45
  4 转基因草鱼F1代对草鱼出血病的抗性  45-47
结论  47-48
参考文献  48-57
致谢  57-58
作者简介  58

转Hu-IFN-α草鱼性腺发育的研究以及Hu-IFN-α在转基因草鱼体内的遗传

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