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皮肤创伤愈合过程中VEGF, TGF-β_1,bFGF的表达与损伤时间的关系

作　者: 李学锋
导　师: 王慧君
学　校: 第一军医大学
专　业: 病理学
关键词: VEGF TGF-β1 bFGF 创伤修复损伤时间推断免疫组化实时荧光定量PCR
分类号: R363
类　型: 硕士论文
年　份: 2004年
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内容摘要

创伤修复是一个在时间和空间上受修复因子调控的复杂生物学过程，多种生物活性物质在创伤修复的不同阶段发挥着重要的调节作用，同时它们在创伤修复中的表达和损伤时间密切相关。其中细胞因子在创伤修复中的活跃表达，使其作为活体伤中的一种分子水平的“生活反应”迹象，成为推断损伤时间新的参考参数。 VEGF，TGF-β₁，bFGF是伤口炎症晚期和修复增生期的主要作用因子，对伤口肉芽组织形成、血管增生和胶原纤维合成有重要作用。我们用免疫组织化学的方法检测了三种细胞因子在小鼠皮肤切创愈合过程中的表达、分布，了解它们的表达与损伤时间的关系；在此基础上，应用实时荧光定量PCR技术，对创缘皮肤组织中TGF-β₁ mRNA的动态表达变化进行研究，以进一步探讨细胞因子mRNA的检测在损伤时间推断中的价值。我们的研究结果显示，VEGF在表皮及皮脂腺呈持续性阳性表达，TGF-β₁、bFGF于伤后3h在表皮表达增强，并分别持续至伤后48h和12h（Kruskal-Wallis检验，P＜0.01）。三种细胞因子在炎性细胞和修复细胞中的表达变化规律相似，伤后6h主要在部分中性粒细胞表达，12h后则主要在巨噬细胞和成纤维细胞。阳性细胞数量随损伤时间的延长而增多，于伤后48h（VEGF）和96h（TGF-pl，bFGF）达峰值（Dunnett检验，P<0.01）。伤后lw和Zw仍见少量巨噬细胞和成纤维细胞表达阳性。TGF一p，切丑NA于伤后24h显著增高（nunnett检验，p<0.01），4sh和72h时还保持在较高水平。死后伤lh，3哑1h，P3h)时，TGF一p lm丑NA的表达有增高的趋势，p6h伤口则下降至对照水平。我们认为，TGF一pl、bFGF蛋白在创缘皮肤表皮细胞的表达强度和损伤时间有关;表达vEGF、TGF一pl、bFGF蛋白的炎性细胞和修复细胞数量和损伤时间有关;TGF一p;切丑NA的表达在创伤修复过程中有明显的动态变化规律，能做为一种代表性极强细胞因子反应参与有一定存活时间（6小时以上）的生前伤的损伤时间推断;但对死后伤与生前伤的鉴别而言，单凭TGF一p，mRNA的表达水平，不能区别6h以内的生前伤和死后伤，可通过结合其它早期表达的细胞因子（如bFGF）进行判断。我们首次运用实时荧光定量PCR技术阐明TGF一p;m丑NA在创伤修复中的动态变化规律，认为实时荧光定量PCR技术能更准确的检测细胞因子mRNA与损伤时间的关系，是目前法医损伤时间推断研究中用于细胞因子定性和定量研究的最有效方法。vEGF、TGF一p，、bFGF蛋白、TGF一p lmRNA表达的检测有应用于损伤时间推断的价值，但考虑到实验动物材料和人体标本的差异、以及法医学尸检材料存在个体差异，具体到法医学实践中的应用，还必须以人体创伤组织为材料进行深入研究，并综合考虑上述因素的影响。

全文目录

英文缩略语对照表  4-5
中文摘要  5-7
英文摘要  7-10
前言  10-13
第一部分小鼠皮肤切创愈合过程中VEGF、TGF-β_1、bFGF蛋白表达的研究  13-28
  材料与方法  13-15
  结果  15-26
  讨论  26-28
第二部分小鼠皮肤切创愈合过程中创缘组织TGF-β_1基因表达的研究  28-49
  材料与方法  28-38
  结果  38-43
  讨论  43-49
全文小结  49-50
参考文献  50-58
综述  58-70
致谢  70-71
在读期间发表文章  71

皮肤创伤愈合过程中VEGF, TGF-β_1,bFGF的表达与损伤时间的关系

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