学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

三种黄鳝RAPD标记和遗传多样性分析

作　者: 贺顺连
导　师: 肖克宇；郭照良
学　校: 湖南农业大学
专　业: 养殖
关键词: RAPD标记遗传多样性山黄鳝穴黄鳝黄鳝
分类号: S917
类　型: 硕士论文
年　份: 2003年
下　载: 150次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

本文应用随机扩增多态DNA(RAPD)技术对黄鳝属(Monopterus)中产自缅甸的山黄鳝(M.cuchia)，印度尼两亚的穴黄鳝(M．fossorius)，及中国的黄鳝(M．albus)，共12个个体基因组DNA的遗传标记进行分析。先用12个个体的混合DNA对OPA、OPB和OPD三个系列40个随机引物进行筛选，有35个引物获得了扩增谱带，30个引物获得了重复性良好的谱带。本试验选用筛选出的30个引物分别对三种黄鳝的12个个体核DNA进行PCR扩增，其扩增产物经琼脂糖凝胶电泳分离后，共获得315个扩增片段，长度为250～5417bp，具有良好的重复性。每个引物在种间均能扩增出DNA多态性片段，每条扩增条带含有2～16个大小不等的片段。30个引物均可将1种、2种甚至3种黄鳝分别区别开来。检出三种黄鳝特异性片段87个，其中M．cuchia有25个，M．fossorius有33个，M．albus有29个。从所检测到的位点中，三种黄鳝种群间的多态位点比例(P)为80.32％，遗传多样性指数(H)为0.1575；种群内的多态位点比例和遗传多样性指数在M．albus中为33.53％、0.0801；在M．cuchia中为48.61％、0.0645，在M．fossorius中为44.88％、0.1380。结果表明，种群间和种群内都具有较高的遗传变异，种群间的遗传变异高于种群内的。通过DPS2003种群遗传分析软件包计算显示：M．cuchia个体间遗传距离(D)最小为0.4505、最大为0.8356，平均为0.5842：M．fossorius个体间遗传距离最小为0.1400、最大为0.9048，平均为0.5250；M．albus个体间遗传距离最小为0.2500、最大为0.7647，平均为0.5293。M．albus与M．fossorius的遗传距离最大，为0.7415；M．cuchia与M．fossorius的遗传距离次之，为0.7035：M．cuchia与M．albus的遗传距离最小，为0.6860。根据遗传距离指数，用UPGMA方法进行聚类分析，构建了三种黄鳝亲缘关系聚类图。图中所示三种黄鳝中M．cuchia与M．albus亲缘关系最近，M．fossorius与其余两种相对要远。

全文目录

前言  10-23
  1 同工酶与蛋白质电泳分析  11-12
  2 DNA遗传标记  12-15
    2.1 RFLP标记  12
    2.2 ALFP标记  12-13
    2.3 DNA指纹  13
      2.3.1 小卫星DNA  13
      2.3.2 微卫星DNA  13
    2.4 mtDNA标记  13-14
    2.5 DNA-PCR  14
    2.6 SNP标记  14-15
      2.6.1 物理差异的方法  14
      2.6.2 化学修饰和杂合双链DNA切割的方法  14
      2.6.3 蛋白结合与双链杂合DNA的切割的方法  14
      2.6.4 DNA测序的方法  14-15
    2.7 RAPD标记  15
  3 RAPD技术鱼类种质资源上的应用  15-22
    3.1 随机扩增多态DNA技术的原理  15
    3.2 RAPD技术的优点  15-16
    3.3 RAPD技术在鱼类种质资源研究中的应用  16-22
      3.3.1 渔业管理  16-17
      3.3.2 DNA多态性的检测及物种、品种的分类与鉴定  17-19
      3.3.3 亲缘关系和系统发育的研究  19-20
      3.3.4 RAPD技术在水产经济动物遗传育种中的应用  20-22
        3.3.4.1 RAPD技术可用来研究子代的遗传结构  20
        3.3.4.2 遗传图谱的构建  20-21
        3.3.4.3 RAPD标记辅助育种  21-22
        3.3.4.4 监测遗传渐渗，维持物种遗传多样性  22
        3.3.4.5 识别同一物种的性别差异  22
      3.3.5 濒色、危物种的保护  22
  4 本项研究目的  22-23
试验研究  23-61
  1 材料和方法  23-28
    1.1 试验材料与来源  23
    1.2 血样的采集  23
    1.3 所用仪器和设备  23-24
    1.4 主要的试剂和酶  24
    1.5 随机引物  24
    1.6 缓冲液及主要试剂的配制  24-25
    1.7 试验方法  25-27
      1.7.1 DNA的提取  25-26
      1.7.2 黄鳝血液DNA的检测  26
        1.7.2.1 DNA浓度与纯度的检测  26
        1.7.2.2 DNA是否降解的检测  26
      1.7.3 PCR 扩增与操作程序  26-27
        1.7.3.1 PCR反应的总体积  26
        1.7.3.2 反应的程序  26-27
      1.7.4 引物的稀释与筛选  27
      1.7.5 RAPD扩增  27
    1.8 分析方法  27-28
      1.8.1 扩增带多态性的确定  27
      1.8.2 随机扩增DNA片段大小的计算  27
      1.8.3 多态位点数  27
      1.8.4 三种黄鳝遗传距离和遗传多样性指数计算  27-28
  2 结果  28-45
    2.1 三种黄鳝形态特征比较  28
    2.2 黄鳝血液DNA的含量与纯度  28-29
    2.3 筛选的引物  29
    2.4 三种黄鳝群体内和间的遗传变异及聚类分析  29-45
      2.4.1 RAPD扩增结果  29
      2.4.2 三种黄鳝的遗传多样性  29
      2.4.3 三种黄鳝的种群内和种群间的聚类分析  29-45
  3 分析与讨论  45-53
    3.1 关于取材样品的问题  45-46
      3.1.1 关于取材样品的代表性  45-46
      3.1.2 RAPD分析的取样数量问题  46
      3.1.3 RAPD分析的取样成分问题  46
    3.2 关于RAPD标记的应用  46-48
    3.3 关于RAPD标记的适用性  48
    3.4 关于三种黄鳝的亲缘关系问题  48-49
    3.5 影响试验结果的因素  49-51
      3.5.1 DNA的质量要求及影响制备因素  49-50
      3.5.2 DNA片段电泳迁移率及主要影响因素  50
        3.5.2.1 琼脂糖浓度  50
        3.5.2.2 DNA分子量  50
        3.5.2.3 电压  50
        3.5.2.4 其它因素  50
      3.5.3 影响随机扩增多态DNA的因素  50-51
        3.5.3.1 引物数量的确定  50-51
        3.5.3.2 反应条件控制  51
    3.6 RAPD标记的应用前景  51-53
      3.6.1 RAPD标记辅助选择  51-52
      3.6.2 RAPD标记应用于黄鳝多样性的保护  52-53
  4 结论  53-54
    4.1 所选的随机引物基本能满足三种黄鳝RAPD遗传分析  53
    4.2 确立了PARD指纹图谱的扩增程序  53
    4.3 三种黄鳝种群间和种群内DNA具有高度多态性  53
    4.4 RPAD技术分析结果与形态学相吻合  53-54
  5 参考文献  54-60
  6 致谢  60-61
作者简历  61-62

三种黄鳝RAPD标记和遗传多样性分析

内容摘要

全文目录

相似论文