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蜂王浆中10-HDA对新生大鼠海马神经细胞增殖作用的研究

作　者: 田静
导　师: 钟方旭
学　校: 武汉工业学院
专　业: 微生物与生化药学
关键词: 海马神经细胞 体外培养 10-HDA 增殖
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 35次
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内容摘要


本课题以新生大鼠海马神经细胞为研究对象,探讨体外培养原代海马神经细胞的适宜条件,采用尼氏染色法和神经特异性烯醇化酶（NSE）免疫组化法鉴定神经元。向培养基中添加不同浓度的10-HDA培养大鼠海马神经细胞,采用MTT法检测细胞存活率;尼氏染色法、NSE法检测海马神经元增殖率;BrdU免疫荧光法检测细胞增殖率。研究结果表明:1.取新生大鼠海马组织,0.125%胰蛋白酶,37℃水浴锅内消化10min,吸弃胰蛋白酶液,加入DMEM/F12（添加10%小牛血清）种植培养基终止消化5min后,吹打20次制成单细胞悬液,100g离心力离心2次,5min/次,于200目筛网过滤,获得较多数目且细胞状态健康的海马神经细胞。2.调整细胞浓度为1.0×105个/mL,接种于多聚鸟氨酸预包被的培养皿中,于37℃,5%CO2培养箱中培养24h后,更换为无血清DMEM/F12（未添加小牛血清,添加2%B27添加剂）维持培养基,培养48h后加入阿糖胞苷（终浓度为5μg/ml）抑制非神经元细胞增殖。加入阿糖胞苷48h后,进行全换液,更换为无血清DMEM/F12维持培养基,以后每周半量换液3次,采用此培养方法神经细胞可以健康生长。3.最佳尼氏染色的条件为25℃下,焦油紫染色30min,75%酒精脱色60s,镜检可明显区分神经元和神经胶质细胞。4.最佳NSE免疫组化的条件为一抗37℃下孵育1h,二抗37℃下孵育20min后,镜检可以明显区分神经元和神经胶质细胞。5.MTT法检测神经细胞存活率的实验表明, 10-HDA中剂量浓度（1.0μmol/L ）可明显促进海马神经细胞的存活和增殖（p<0.05）,增殖率达到（17.25±0.074）%。6.BrdU免疫荧光法检测神经细胞增值率的研究,试验表明:中浓度剂量（1.0μmol/L）10-HDA对神经细胞有增殖作用（p<0.05）,神经细胞增殖率达（19.4±1.24）%,而低浓度组（0.1μmol/L）、高浓度组（10μmol/L）和空白对照组相对于中浓度组（1.0μmol/L）而言,神经细胞数量无明显的变化。7.尼氏染色法检测神经元增殖率,经试验表明:中浓度剂量（1.0μmol/L）10-HDA对神经细胞有增殖作用（p<0.05）,神经细胞增殖率达（18.6±2.354）%,而低浓度组（0.1μmol/L）、高浓度组（10μmol/L）和空白对照组相对于中浓度组（1.0μmol/L）而言,神经细胞数量无明显的变化。8.NSE免疫组化法检测神经元增殖率的研究表明:中浓度剂量（1.0μmol/L）10-HDA对神经细胞有增殖作用（p<0.05）,神经细胞增殖率达（19.04±2.354）%,而低浓度组（0.1μmol/L）、高浓度组（10μmol/L）和空白对照组相对于中浓度组（1.0μmol/L）而言,神经细胞数量无明显的变化。综上所述,通过向体外培养的大鼠海马神经细胞中添加适当浓度的10-HDA后,对大鼠海马神经细胞有增殖作用。

全文目录


摘要  4-6
Abstract  6-10
第1章 绪论  10-21
  1.1 蜂王浆概述  10-11
  1.2 蜂王浆中主要的营养物质  11-12
    1.2.1 蛋白质  11
    1.2.2 氨基酸  11
    1.2.3 脂类  11
    1.2.4 维生素类  11
    1.2.5 糖类  11-12
    1.2.6 矿物质  12
  1.3 蜂王浆的主要作用  12-14
    1.3.1 提高机体免疫功能，延缓衰老  12-13
    1.3.2 蜂王浆的抗菌消炎和抗肿瘤作用  13-14
    1.3.3 蜂王浆对心血管疾病的作用  14
  1.4 蜂王浆中10-HDA 的研究进展  14-16
    1.4.1 10-HDA 概述  14-15
    1.4.2 10-HDA 药理作用的研究  15-16
  1.5 学习记忆与哺乳动物海马区的关系  16-18
    1.5.1 学习与记忆概述  16
    1.5.2 不同脑区对学习、记忆的功能定位  16-17
    1.5.3 学习和记忆的机制  17-18
  1.6 神经营养因子与学习记忆功能的研究进展  18-20
  1.7 立题依据和研究内容  20-21
    1.7.1 立题依据  20
    1.7.2 研究内容  20-21
第2章 试验材料与方法  21-28
  2.1 试验材料  21
  2.2 试验仪器  21
  2.3 试验药品与试剂  21-22
  2.4 所需试剂配制  22-23
  2.5 试验方法  23-28
    2.5.1 培养器皿的准备  23
    2.5.2 新生大鼠海马神经细胞培养  23-24
    2.5.3 尼氏染色法鉴定神经元  24-25
    2.5.4 NSE 免疫细胞化学鉴定神经元  25-26
    2.5.5 10-HDA 对海马细胞存活的影响  26
    2.5.6 10-HDA 对海马细胞增殖率的影响  26-27
    2.5.7 10-HDA 对海马神经元增殖率的影响  27-28
第3章 结果与讨论  28-39
  3.1 大鼠乳鼠海马神经细胞培养  28-33
    3.1.1 新生大鼠海马神经细胞培养条件的确立  28-30
    3.1.2 新生大鼠海马神经细胞形态学观察及神经元的鉴定  30-32
    3.1.3 MTT 法检测神经细胞存活  32-33
  3.2 10-HDA 对海马神经细胞增殖的影响  33-39
    3.2.1 MTT 法检测神经细胞增殖  33-34
    3.2.2 BrdU 免疫荧光法检测神经细胞增殖率  34-35
    3.2.3 尼氏染色检测神经元增殖率  35-36
    3.2.4 NSE 细胞免疫组化检测神经元增殖率  36-39
第4章 结论  39-40
参考文献  40-46
致谢  46-47
附录  47-52
攻读学位期间的研究成果  52

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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药药理学 > 中药实验药理
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