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细胞色素P450 2C19在中国汉族人群正常组织中的分布及其与肿瘤组织中的表达差异研究

作　者: 吴敏良
导　师: 陈枢青
学　校: 浙江大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 中国汉族人群细胞色素P450 表达差异正常组织肿瘤组织 CYP2C19酶表达情况药物代谢 CYP2C19基因癌症易感性
分类号: R730.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2003年
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内容摘要

背景与目的细胞色素P450 2C19(CYP2C19)是人体内进行药物代谢的主要代谢酶，其参与代谢的药物包括美芬妥因、奥美拉唑、安定、氯胍、心得安和一些抗抑郁药等。CYP2C19基因存在多态性，它是引起一系列重要的临床药物的药代动力学巨大差异的根源所在。根据其基因型改变而引起酶代谢活性的改变，可以将人群根据对S-美芬妥因的4’羟化能力很清楚地分为二大类：强代谢(EMs)和弱代谢(PMs)。在正常人群中，其基因型就预示着相应的表型。到目前为止已经有15种导致PM表型的变异等位基因(CYP2C192到CYP2C1915)得到证实。影响CYP2C19酶活性的因素除了基因多态性以外，还有饮食因素、环境因素、药物间的相互作用以及疾病状况等。同时EM和PM基因型与表型的分布存在很大的民族差异性，东方人群的PMs发生率明显高于其他民族。 CYP2C19酶强代谢或弱代谢表型都会影响癌症易感性，强代谢表型可以对前致癌原进行快速代谢为致癌原，对DNA造成损害而介导癌症的发生；弱代谢表型则对外源性的致癌物不能有效地进行去毒性而发生癌变。M.L Williams等在对16例有病理进展的癌症病例的CYP2C19基因型与表型分析表明，CYP2C19酶活性的降低可能影响到正规的肿瘤治疗过程中化疗药物的有效性与毒性作用。同浙江大学硕士研咒生毕业论文时 CYI。ZCIg基冈型与表型的不相符也能反映药物代谢能力的变化，RJ此基因型／表型探针能用于病人疾病进展过程中发生的酶活性的改变情况。细胞色素 P450 ZC亚型的组织学定位，己经有许多学者对其 mRNA的表达进行了旬究与报道。Zeldjn等贝1在肾脏组织＊检测到了CYPZCS 和CYPZCgmRNA。Ilukkanen等【‘川用单一的CYPZC引物，运用l｛T—PCR技术在肺小义气管一肺泡的巨噬细胞户检测到CYPZC mRNA．Nab。＊ i。a等Nk＆道了在肺的微粒体中有CYPZCS蛋白的表达。Mace等n’」在支气管粘膜和周围肺组织中检测到 CYPZCS和 CYPZC18芒＊RNA的转录口McF。灯en等【‘叩U在成人脑组织中检坝到了CYPZCS 和CYPIAI的mRNA；Huarlg等［‘爿又在乳腺组织中检坝到了 CYPZC。RNAs，但没有检测到个别的CYpZC亚型。Z。phi，OpOu工OSN’］在成人表皮炎病人中发现其 CYpZC18mRNA的表达是很丰富的。有学者对个同时期的胎盘中 CYPZC mRNA的表达情况进行分析显不，在成熟期的胎盘中没有 CYPZC TflRNA的表达，但在二个月的胎盘中则可检测到CYI。2（：。RNA的农达。 CYPZC19作为 CYPZC亚类中的一员，它主要是在且f细胞内合成并发挥其代谢作川的，在肝外组织中的分布是很少的。r s．Klose等口‘］对器官库中的组织肾上腺、紫丸、前列腺、肾脏、卵巢等提取的RNA，和直接购买的脑、于宫、乳腺。帅和I－：指肠的总RNA一起川特异性Cy陀CS、CU’2C9、CY卜2C18、CYPZCm引物对肝外组织中CW。ZC。m1训A的分小恬况进行研究分析表明，在肾、肾上腺、帅。了宫。乳腺和卯巢。－fi检测到CW’2C8 11；RN八；在肾、睾丸、肾上腺、前列腺和卵巢一。纵织中有C川’2C9m1川A：CYI’冗m 帜N八则只在脑、子官和乳腺中有表达，介肾赃中方撇量的表达；CYI’ZC19 m＊八除了在卜－二指肠中有少量的表达外，其他的肝外纵织中均无CYPZC 19；；以N八的农达。。t－。口人群的nP儿19 卜M。表企厂／博囚多态性的研究c经有很多学者进行八08 心第2 山浙江大学项士研兜生毕业论文了研究，也已经阐明PMS的发生率明显高于西方人群。由于中国人群的饮食结构与西方人群相比存在着很大的差异，同时又受到地理环境等因素的影响，有可能使 CYPZCIg mRNA在不同组织的分布情况与西方人群有所不同。为了调查中国汉族人群中癌症患者不同组织中CYPZC19 mRNA表达情况，我们采用肿瘤外科或普外科手术中新鲜的病理标本，运用RT—PCR方法检测了包括肝脏在内的十一种组织中CYPZC19 mRNA的表达情况以及发生癌症情况下表达量的改变状况，并运用WESTERN BLOTTING技术检狈了CYPZC19mRNA 表达产物即蛋白质的表达，探讨中国汉族人群中CYPZC19mRNA在不同组织的分布规律，以及与肿瘤发生的关系。材料与方法1．癌症组织与癌旁组织中CYPZC19基因mRNA表达差异研究：采用半定量RTPCR方法检测了下列癌症组织及配对的癌旁正常组织中CYPZCIg的 WA表达差异：肝癌组织、大肠癌组织、胃癌组织、乳腺癌组织、食道癌组织、肺癌组织、宫颈癌组织、脑瘤组织、胰腺癌组织、卵巢癌组织、肾癌以及不同肝癌细胞株、大肠癌细胞株与宫颈癌细胞株。2．CYPZC19 CDNA序列克隆并测序证实：为了检测盯一卜＊加A产物的准确性，我们运用叮－KR技术分别克隆了CYI‘2C19 cDNA序列，将它连接于pGEM－T－Easy载体上，并通过对质粒的酶切和测序结果均显示重组质粒构建成功。3．运用 WESTERN BLOT”r1N＊技术对CYPZC19的蛋白表达情况进行定性分析：为了检测CYPZC19基因mRNA的表达产物，即蛋白质的表达情况，我们采用 Western B

全文目录

一、中文摘要  3-8
二、英文摘要  8-12
三、正文  12-40
  前言  12-14
  实验材料  14-20
  实验方法  20-26
  结果  26-33
  讨论  33-35
  结论  35-36
  参考文献  36-40
四、综述  40-69
五、致谢  69

细胞色素P450 2C19在中国汉族人群正常组织中的分布及其与肿瘤组织中的表达差异研究

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