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海岛棉组培过程细胞形态特性与基因表达差异的研究

作　者: 代鑫
导　师: 曲延英
学　校: 新疆农业大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 海岛棉组织培养细胞形态表达差异
分类号: S562
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 23次
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内容摘要

海岛棉组织培养过程的研究对于促进长绒棉分子育种改良工程具有极其重要的意义,目前已有一些关于陆地棉组织培养过程中形态变化和分子机理的研究报道,但是对于海岛棉组织培养过程的细胞形态变化和分子机制研究寥寥无几。本研究以海岛棉新海16为材料,选取胚性愈伤组织初期,胚性愈伤组织后期,体细胞胚形态建成初期的愈伤组织和对照无菌苗叶片进行石蜡切片观察和基因组DNA提取,初步说明了体胚中出现细胞凋亡现象,接着用DDRT-PCR方法寻找胚性愈伤初期的差异表达基因,为今后长绒棉分子育种改良奠定一定分子和细胞学基础。本研究取得的主要结果如下:1.选取胚性愈伤组织初期、后期及体细胞胚初期的愈伤组织和对照无菌苗叶片进行石蜡切片观察,发现体细胞胚初期的细胞形态与对照无菌苗幼叶相似,并且通过测微尺测量细胞壁厚度发现,两者细胞壁厚度相差不大。而在胚性愈伤初期细胞略微变大,细胞与细胞间联系紧密,到了胚性愈伤后期形成独立的细胞团结构。2.提取胚性愈伤组织初期,胚性愈伤组织后期,体细胞胚形态建成初期的愈伤组织和对照无菌苗叶片组织的DNA经2%琼脂糖凝胶电泳检测发现胚性愈伤组织后期基因组DNA形成了明显梯状条带。证实了胚性愈伤组织再分化形成体细胞胚要经历细胞凋亡的阶段。3.分别提取胚性愈伤组织和对照无菌幼苗下胚轴的总RNA,进行DDRT-PCR,在胚性愈伤组织中获得重复性高的条带12条。将这12条差异带与pMDTM18-T Vector连接,转化到DH5a菌株进行蓝白斑筛选,测序,最后得到胚性愈伤初期的4个阳性差异片段。4.将4个差异序列在GeneBank上进行blastN比对,发现这些序列与相似基因的同源性不高,其中19号序列与玉米淀粉合成酶基因、38号序列与番茄GMPase基因和55号与拟南芥的钙调素结合蛋白具有一定同源性。BlastX比对仅38号序列搜索到与葡萄和拟南芥的一些功能未知蛋白具有同源性。

全文目录

摘要  3-4
Abstract  4-7
第1章绪论  7-17
  1.1 棉花体细胞培养的研究  7-9
  1.2 棉花体细胞形态建成及细胞凋亡的研究  9-11
  1.3 棉花体细胞胚胎发生相关基因的研究及相关方法  11-15
  1.4 研究的背景与意义  15-17
第2章不同时期愈伤组织材料在细胞形态及 PCD 的变化  17-24
  2.1 材料、试剂和设备  17-18
  2.2 实验方法  18-20
  2.3 结果与分析  20-22
  2.4 讨论  22-24
第3章海岛棉组织培养过程 DDRT-PCR 的构建  24-38
  3.1 材料、试剂与仪器  24-26
  3.2 实验方法  26-33
  3.3 结果与分析  33-36
  3.4 讨论  36-38
第4章胚性愈伤形成差异条带克隆及生物信息学分析  38-51
  4.1 材料、试剂与仪器  38-39
  4.2 实验方法  39-43
  4.3 结果与分析  43-48
  4.4 讨论  48-51
全文总结  51-52
参考文献  52-60
致谢  60-61
作者简介  61

海岛棉组培过程细胞形态特性与基因表达差异的研究

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