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白花丹参叶对大鼠局灶性脑梗死的保护作用及其机制研究

作　者: 王贤军
导　师: 夏作理
学　校: 泰山医学院
专　业: 老年医学
关键词: 局灶性脑梗死 rCBF 细胞凋亡 HSP70 Caspase-3 c-Fos
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2005年
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内容摘要

目的：探讨大鼠局灶性脑梗死后梗死区、半暗带区rCBF,受损皮层表面积及c-Fos、HSP70、Caspase-3表达的动态演变及白花丹参叶水提物对其影响。方法：采用光化学发光法诱导大鼠局灶性脑梗死模型。应用激光多普勒微循环测量仪监测大鼠局灶性脑梗死后各时点梗死区和半暗带区皮层血流量(rCBF);用image-proplus4.0软件系统计算大脑皮层红染区、蓝染区的表面积；制作8um连续冠状冰冻切片,苏木苏一伊红(HE)染色,观察局灶性脑梗死后的病理变化；并用TdT-介导dUTP-生物缺口末端标记(TUNEL)法检测凋亡细胞；利用SP法进行免疫组织化学染色,检测c-Fos、HSP70、Caspase-3等蛋白的表达。结果：1、脑梗死后梗死区rCBF呈波浪样改变,3h降至最低,为正常血流量的(9.36±1.72)%,6h后回升,12h达高峰,为正常血流量的(31.18±1.44)%,24-48h rCBF再度下降,与3h相比无显著性差异(P>0.05)。半暗带区rCBF 6 h降至最低,为正常皮层血流量的(30.88±7.11)%,9-48 h呈上升趋势,至48 h rCBF基本恢复,约为正常(91.90±4.56)%,较前一时点有显著性差异(P<0.05)。2、光照后30 min即有明显的红染区,随时间的延长逐渐扩大,具有明显的时间依赖性。48 h-3 d红染区的皮层表面积达峰值,4-6 d略有下降,与3d比较无显著性差异(P>0.05)。而蓝染区的皮层表面积呈明显的双峰样改变,3-9 h呈逐渐增大的趋势,12h后减小,24 h重新增大并升至最高点。36 h蓝染区的表面积较24 h再度减小,随时间的推移,蓝染区逐渐消失。3、HE及TUNEL显示坏死细胞主要集中于梗死区,凋亡细胞分布于梗死区的周围,二者均呈半球状向四周放射性扩展;光照后3 h即有大量坏死细胞出现,6h后凋亡细胞才出现,随着梗死时间的延长,二者均有明显的增加,坏死细胞于光照后24h达高峰,凋亡细胞在3d达高峰。对照及假手术组未发现坏死、凋亡细胞。4、光照后30 min即有大量c-Fos蛋白表达,主要集中于梗死区周围,并随时间的延长相应增加,6h表达至高峰；梗死后3h整个同侧皮层出现c-Fos的弥漫性表达,较梗死区周围少,差异具有显著性(P<0.05)；对侧大脑皮层在6h出现c-Fos表达,但较光照同侧表达量少,具有显著性差异(P<0.05)。9h后各时点的表达量逐渐减少,且只限于梗死区周围。梗死区均未见c-Fos表达。对照及假手术组未见c-Fos表达。5、对照组、假手术组均未发现HSP70的阳性表达。局灶性脑梗死组12 h即有HSP70的表达,48 h时HSP70表达至高峰,阳性反应局限于梗死区周围。6、光照后30min即有Caspase-3阳性细胞出现,36-48h表达至高峰,阳性细胞局限于梗死区周围。对照组、假手术组均未发现Caspase-3的阳性表达。7、白花丹参叶水提物预处理组各时点,红染区、蓝染区皮层表面积均较单纯局灶性脑梗死组明显减小；坏死细胞、凋亡细胞及Caspase-3日性细胞明显减少。HSP70阳性细胞明显增多。低剂量组与中、高剂量组大部分时点具有显著性差异(P<0.01),而中剂量组与高剂量组间大部分时点无明显的差异(P>0.05)。结论：1、局灶性脑梗死后梗死区、半暗带区rCBF具有明显的时间和空间的变化规律。半暗带区rCBF的恢复,凋亡细胞的出现,蓝染区表面积的双峰样改变及红染区表面积的进行性扩大,提示此模型存在缺血再灌注的特点,神经细胞凋亡由再灌注损伤所致。2、局灶性脑梗死后坏死细胞主要位于梗死区,凋亡细胞主要分布于梗死区周围,并均呈半球状向四周放射性扩展。迟发性细胞凋亡的存在,可能使抗凋亡成为治疗脑梗死的一种有效的途径之一。3、局灶性脑梗死可诱导神经细胞凋亡与HSP70、Caspase-3的表达,三者的分布一致,但HSP70、Caspase-3的表达高峰明显早于细胞凋亡。Caspase-3的表达介导了迟发性细胞凋亡。c-Fos的表达具有远隔效应,具体机制不清。4、白花丹参叶水提物对大鼠局灶性脑梗死具有明显的保护作用,HSP70表达的增加,Caspase-3表达的减少,进而导致细胞凋亡及坏死的减轻,是其可能机制之一。

全文目录

前言  3-5
中文摘要  5-7
英文摘要  7-10
符号说明  10-11
材料与方法  11-16
实验结果一  16-25
实验结果二  25-31
讨论  31-37
结论  37-38
附图表  38-44
参考文献  44-47
综述  47-58
  大鼠局灶性脑缺血模型的研究进展  47-53
    参考文献  51-53
  急性脑梗死溶栓治疗与再灌注损伤  53-58
    参考文献  56-58
致谢  58-59
攻读学位期间发表的学术论文  59-60

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