学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

串联表达GA株MDV gB主要表位基因重组鸡痘病毒的构建及其免疫保护作用

作　者: 钱莺娟
导　师: 陈溥言
学　校: 南京农业大学
专　业: 预防兽医学
关键词: 马立克氏病病毒 糖蛋白B 250-460位氨基酸 重组鸡痘病毒 免疫保护效果
分类号: S852.65
类　型: 硕士论文
年　份: 2003年
下　载: 64次
引　用: 4次
阅　读: 论文下载
 

内容摘要


根据已发表文献及DNAstar软件分析，选取GA株马立克氏病病毒（MDV）BamHI-I3区糖蛋白B 250-460位氨基酸为目的片段，进行串联表达。根据GenBank发表的序列，Primer5.0软件的辅助下分别设计两对引物Primer（U1）、Primer（U2）和Primer（D1）、Primer（D2），并在上游片段5’端加上ATG GCG、下游片段5’端设计一个长9个氨基酸的linker（GSLAGALGL）和下游片段3’端加上TAA，使上游片段和下游片段串联后形成一个完整的阅读框。用PCR扩增出上游片段gB（U）和下游片段gB（L／D）。将PCR产物分别克隆入pBluescriptSKⅡ+，构建成pSKgB（U）和pSKgB（L／D）。从pSKgB（U）以XbaⅠ+BamHⅠ酶切出gB（U），克隆入pSKgB（L／D），构建成pSKgB（U／L／D）。然后从pSKgB（U／L／D）中以XbaⅠ+PstⅠ酶切出串联片段gB（U／L／D），克隆入pEFgpt12S，构建成pEFMDgB（U／L／D）重组鸡痘病毒转移质粒栽体。 确定转染时亲本毒的用量及筛选重组病毒选择性培养基中霉酚酸的浓度后，用磷酸钙共沉淀法，将鸡痘病毒转移质粒载体pEFMDgB（U／L／D）与鸡痘病毒FPV 282E4株在次代CEF上进行同源重组，将目的基因导入FPV ORF1区。用霉酚酸法连续筛选10代获得重组病毒rFPV-MDgB（U／L／D）。用间接免疫荧光试验（IFA）鉴定，可见阳性重组病毒表达产物产生特异性荧光，表明重组病毒成功表达了串联目的片段且串联表达产物具有免疫原性：对亲本毒和重组毒的TCID50试验测定结果是两者的TCID50值基本一致，表明外源基因插入鸡痘病毒ORF1后不影响病毒的复制和生物学特性。 将筛选到的重组鸡痘病毒rFPV-MDgB（U／L／D）继续在2％MEM中5代，测定重组病毒分别在选择性培养基和普通培养基中的病毒滴度，并与亲本毒的滴度相比较，结果基本一致，说明重组病毒已得到了纯化且比较稳定。用rFPV-MDgB（U／L／D）+CVI988（商品苗）和CVI988（商品苗）分别免疫1日龄SPF鸡，8日龄时用RB1B株超强毒MDV攻毒，隔离饲养9周，在此期间，剖检死亡鸡，检查记录MD的病变情况，并每周每组取2-3只鸡采血制备血清和每只鸡采翅部羽毛6根，饲养9周后全部扑杀存活鸡，统计记录MD的发病情况。疫苗对RB1B株MDV在羽毛囊中复制的影响的AGP测定结果为两试验组疫苗免疫均可抑制RB1B株超强毒MDV羽毛囊排毒；攻毒后血液中MDV抗体水串联表达GA沐MDv gB主要表位荃因重组鸡痘病毒的构建及其免没保护作用平的AGP检测结果是在疫苗免疫后的第三周开始试验鸡体内MOV抗体水平逐步稳定上升;疚苗免疚效果的结果是两种疫苗免疚后均能保护试验鸡抵抗RBIB株超强毒MOv的感染，与攻毒对照组的差异显著，但两试验组的差异不显著.

全文目录


中文摘要  5-7
英文摘要  7-9
前言  9-11
第一部分 文献综述  11-37
  第一章 马立克氏病及其研究进展  11-27
    1 MDV基因组  11-12
    2 肿瘤相关基因  12-14
    3 病毒编码的糖蛋白  14-15
    4 马立克氏病的发病机理  15-16
    5 MD疫苗  16-19
    6 小结  19-20
    参考文献  20-27
  第二章 应用禽痘病毒表达载体研制重组疫苗的研究进展  27-37
    1 禽痘病毒的分子生物学特性  27-28
    2 禽痘病毒表达载体的优越性  28
    3 重组禽痘病毒的构建  28-31
    4 外源基因在重组禽痘病毒中的表达  31-32
    5 重组禽痘病毒疫苗的安全性、应用前景及其存在的问题  32-33
    6 小结  33-34
    参考文献  34-37
第二部分 研究内容  37-79
  第一章 目的片段的选取及重组鸡痘病毒转移质粒载体pEFMDgB(U／L／D)的构建  37-50
    摘要  37-38
    材料  38-39
    方法  39-41
    结果  41-42
    讨论  42-48
    参考文献  48-49
    英文摘要  49-50
  第二章 串联目的片段在重组鸡痘病毒中的表达及重组病毒生物学特性的研究  50-65
    摘要  50-51
    材料  51
    方法  51-53
    结果  53-57
    讨论  57-62
    参考文献  62-64
    英文摘要  64-65
  第三章 串联表达目的片段重组鸡痘病毒的免疫效力试验  65-79
    摘要  65-66
    材料  66
    方法  66-68
    结果  68-70
    讨论  70-77
    参考文献  77-78
    英文摘要  78-79
全文总结  79-80
致谢  80-81
攻读学位期间发表的学术论文  81

相似论文

  1. 天然冰片、合成冰片及薄荷脑对P-糖蛋白的影响及其机制研究,R285
  2. J亚型禽白血病病毒抗体检测方法的建立及LTR体外启动活性分析,S858.31
  3. 妊娠标记蛋白PAPPA，PLAC8和PAG mRNA在妊娠奶牛外周血浆中的丰度变化,S858.23
  4. 慢性肾衰竭患者血清锌-α2-糖蛋白水平变化及与营养不良的关系分析,R692.5
  5. 顺铂对小鼠肺癌细胞中P-糖蛋白表达的影响,R734.2
  6. 海藻色素糖蛋白对小鼠肝癌细胞增殖活性的影响研究,R735.7
  7. 去唾液酸糖蛋白受体在人睾丸组织内的表达,R512.62
  8. 药用辅料对更昔洛韦肠道吸收影响的研究,R96
  9. 抗炎抗凝双效融合蛋白TAP-SSL5的功能研究,R543.5
  10. 难治性类风湿性关节炎的耐药性与多药耐药基因MDR1C3435T多态性的相关研究,R593.22
  11. 华中五味子对奥氮平在大鼠脑内药动学的影响,R285.5
  12. 蚯蚓纤溶酶的分离纯化及部分组分的性质,Q814.1
  13. 狂犬病病毒糖蛋白基因重组逆转录病毒的构建及其免疫原性研究,S852.65
  14. 结合珠蛋白的分离纯化与鉴定及其与奶牛乳腺炎的关系,S858.23
  15. 新型多药耐药逆转剂的发现及功能评价,R914
  16. 内质网居民糖蛋白KDELC1克隆表达及初步功能研究,R735.7
  17. P-gp、MRP1、GST-π在预测宫颈癌新辅助化疗疗效的作用研究,R737.33
  18. α_1-酸性糖蛋白和超敏C-反应蛋白动态监测在急性胰腺炎早期严重度评估中的意义,R576
  19. 曲霉和马尔尼菲氏青霉多糖蛋白检测方法的研究,R446.5
  20. ASGPR介导的靶向siRNA抑制HBV的复制与表达,R346
  21. 对耐药肿瘤有效的三尖杉宁碱衍生物的设计与合成和生物活性评价,R284.1

中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 动物医学（兽医学） > 兽医基础科学 > 家畜微生物学（兽医病原微生物学） > 家畜病毒学
© 2012 www.xueweilunwen.com