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海藻色素糖蛋白对小鼠肝癌细胞增殖活性的影响研究

作 者: 李帅
导 师: 钟进义
学 校: 青岛大学
专 业: 卫生毒理学
关键词: 海藻色素糖蛋白(SPG) 肝癌细胞 增殖
分类号: R735.7
类 型: 硕士论文
年 份: 2011年
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内容摘要


目的:本研究采用体外细胞培养及动物实验的方法,观察了麒麟菜海藻色素糖蛋白(Seaweed pigment glycoprotein, SPG)对小鼠H22肝癌细胞增殖活性水平、肝癌组织中PCNA和Bcl-2蛋白表达水平、抑瘤率等指标,探讨海藻色素糖蛋白对肝癌细胞增殖活性的影响。方法:1体外实验:将浓度分别为100、50、10 mg/L的SPG与处于对数生长期的小鼠H22肝癌细胞共同培养24h,用MTT法测定癌细胞增殖活性。另设不加SPG的肝癌细胞作为空白对照,以20mg/L环磷酰胺作为阳性对照,用MTT法测定细胞增殖活性。2体内实验:将50只体重为18-20g的健康昆明种小鼠于本实验室适应性喂养5天。无菌条件下抽取传代接种H22肝癌第6d的小鼠腹水,在健康小鼠的右侧腋窝处每只皮下接种0.2m1。动物接种后24h,随机分为肿瘤对照组,高、中、低剂量海藻色素糖蛋白组及环磷酰胺组,每组10只,雌雄各半。三个剂量组分别经口每日灌胃给予浓度为100、50、10mg/kg的海藻色素糖蛋白水溶液,肿瘤对照组给予等量生理盐水,连续10d。环磷酰胺组小鼠腹腔注射20mg/kg环磷酰胺,隔日一次。实验期间令动物自由进食和饮水。于末次给药后第二天将小鼠脱臼处死,无菌条件下剥取瘤组织备检。(1)增殖活性:用MTT法测定肿瘤细胞增殖活性。(2)蛋白表达:用免疫组化法检测瘤组织中PCNA和Bcl-2蛋白的表达水平。(3)抑瘤率:用电子天平称量小鼠瘤重,并计算抑瘤率。结果:1体外实验结果:细胞增殖活性测定结果显示,在同一作用时间点,100mg/L的海藻色素糖蛋白剂量组细胞增殖活性为0.404±0.008,明显低于肿瘤对照组0.545±0.002(P<0.05),而50、l0mg/L剂量组增殖活性分别为0.445±0.005和0.515±0.009,表明一定浓度的海藻色素糖蛋白对H22肝癌细胞增殖具有抑制作用,且随着SPG剂量的增加,H22肝癌细胞增殖活性依次降低(P<0.05)。2体内实验结果:(1)增殖活性:高剂量海藻色素糖蛋白组和肿瘤对照组的瘤细胞增殖活性以吸光度表示分别为(0.711±0.028)和(1.135±0.032),差别有显著性(P<0.05)。(2)PCNA蛋白表达水平:高剂量海藻色素糖蛋白组肿瘤组织中PCNA蛋白阳性表达率为28.32%,肿瘤对照组为72.78%,二者差异有显著性意义(P<0.05)(3)Bcl-2蛋白表达水平:肿瘤对照组和高剂量海藻色素糖蛋白剂量组Bcl-2蛋白阳性表达率分别为65.16%和16.78%,经检验,差异均有显著性(P<0.05)(4)抑瘤率:肿瘤对照组和高剂量海藻色素糖蛋白组的平均瘤重分别为(0.55±0.23)g和(0.31±0.05)g,二者差别有显著性(P<0.05);高剂量组肿瘤生长抑制率达43.64%。结论:1、海藻色素糖蛋白对小鼠H22肝癌细胞增殖具有一定抑制作用。2、海藻色素糖蛋白能够降低小鼠H22肝癌组织中PCNA蛋白表达水平,抑制肝癌细胞增殖。3、海藻色素糖蛋白能够降低小鼠H22肝癌细胞增殖活性,降低肝癌组织中Bcl-2蛋白表达水平。4、海藻色素糖蛋白能够抑制小鼠肝肿瘤生长,为在预防和治疗肝癌等疾病方面的功效研究和开发利用提供科学依据。

全文目录


摘要  2-4
Abstract  4-9
引言  9-11
研究内容  11-22
  一 材料与方法  11-15
    1.1 实验材料  11-12
    1.2 实验方法  12-14
      1.2.1 体外实验方法  12
      1.2.2 体内实验方法  12-14
    1.3 统计分析  14-15
  二 结果  15-22
    2.1 体外实验结果  15-16
    2.2 体内实验结果  16-22
      2.2.1 肿瘤细胞增殖活性  16-17
      2.2.2 PCNA蛋白表达结果  17-19
      2.2.3 Bcl-2蛋白表达结果  19-21
      2.2.4 肿瘤生长抑制率  21-22
讨论  22-26
结论  26-27
参考文献  27-31
综述  31-42
  参考文献  38-42
攻读硕士学位期间的研究成果  42-43
致谢  43-44

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 消化系肿瘤 > 肝肿瘤
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